ELISA eller enzymkopplad immunabsorberande analys , är en biologisk laboratorieteknik som används för att detektera närvaron av ett antigen eller en antikropp. Den används ofta vid medicinsk diagnos för att bestämma huruvida en patient har utsatts för en viss typ av infektion.
För att utföra en ELISA , provet — innehållande antigenet av intresse — är förankrad vid en fasta bäraren i en skål . En lösning med den komplementära antikropp tillsätts till skålen , och antikroppen binder till antigenet. Överskott av antikropp tvättas sedan bort och lämnar endast de antigen-antikropp - bundna par i skålen. Detta kan visualiseras genom att lägga till en fluorescerande molekyl som binder till antikroppen och avger en visuell signal som sedan kan kvantifieras. På detta sätt kan närvaron och mängden av antigenet av intresse bestämmas indirekt . Addera Western Blöt
En Western blot är en annan typ av teknik som används för att detektera ett specifikt protein i ett prov och bestämma dess storlek. Först prov proteiner utspridda efter storlek på en gel med hjälp av gelelektrofores . Vid denna punkt, proteiner är inte synliga för blotta ögat. Forskare överför sedan proteiner till ett membran och tillsätt en lösning innehållande antikroppen mot antigenet av intresse. Efter borttvättning av överskott av lösning är antikroppen bunden till antigenet på membranet.
Lägga till en sekundär antikropp orsakar den ursprungliga eller primära antikroppen för att avge ljus . Kvantifiering av mängden ljus som avges tillåter forskare att påvisa förekomst av antigenet , dess storlek jämfört med andra proteiner och dess relativa koncentration . Addera Immunohistokemi
Immunohistochemistry är en teknik som gör det möjligt för forskare att visualisera placeringen av ett protein i ett vävnadsprov . Små skivor av ett prov bereds och en primär antikropp , som fäster vid antigen av intresse , tillsätts . Överskott lösning tvättas bort innan forskare lägga till en sekundär antikropp . Denna antikropp fäster till den primära antikropp-antigen -par och emitterar ljus , vilket signalerar läget för antigenet av intresse .
Forskare använder ett mikroskop för att visualisera , där antigenet är i cellen. Flera olika antikroppar , var och en specifik för ett visst protein, kan användas för att bestämma det relativa läget för flera molekyler i en cell. Om detta är målet, är olika färgade sekundära antikroppar används för att skilja mellan de olika molekyler av intresse . Addera Flödescytometri
Fluorescens - aktiverad cellsortering — eller FACS — är en typ av flödescytometri användas för att separera olika typer av celler i en lösning . Varje annan typ av cell är " taggade" med en antikropp som är specifik för denna celltyp . Var och en av dessa antikroppar avger en annan färg på ljuset . En maskin agiterar lösningen för att bryta den i individuella droppar och använder en sensor för att detektera färgen på varje droppe . Maskinen sorterar cellerna genom avgivna ljusets färg, dela dem baserat på den typ av protein de innehåller . FACS metod tillåter forskare att sortera och kvantifiera celler av intresse för deras frågeställningar .
Immuno - elektronmikroskopi
Normal elektronmikroskopi kan forskare undersöka strukturen i en cell förstoras upp till 1 miljon gånger . Immuno - elektronmikroskopi använder egenskaperna hos antikropp - antigenbindning att visualisera särskilda proteiner i mycket tunna vävnadssnitt . Först är antikroppar med bifogade guldpartiklar får binda till antigenet av intresse . Ett elektronmikroskop visualiserar sedan guldpartiklarna , vilket ger forskare en bild av var proteinet är lokaliserat i cellen.
Även immuno- elektronmikroskopi är enkelt i teorin, är det tekniskt svårt och mycket kostsamt att anställa , vilket begränsar dess popularitet för användning i många biologiska forskningsprogram . Addera
Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom