1. Home
  2. alternativ medicin
  3. biter Stings
  4. Cancer
  5. förhållanden Behandlingar
  6. Tandhälsa
  7. Diet Nutrition
  8. Family Health
  9. Sjukvård Industri
  10. Mental hälsa
  11. Folkhälsa säkerhet
  12. Verksamheten Verksamheten

Felsökning för Gelelektrofores

Polyakrylamidgelelektrofores eller PAGE, är en teknik som vanligen används för separation av organiska molekyler i ett biologiskt prov . Molekyler med lägre storlek och vikt migrera snabbare på en polyakrylamidgel när en elektrisk ström appliceras. Tydliga distinkta band i allmänhet observeras efter den avslutade gelen inkuberas i en viss fläck . Det är en relativt enkel metod . Men avsaknaden av band eller band som smeta ut eller är oren kan tyda på ett problem i ett eller flera steg i förfarandet . Du bör följa grundläggande riktlinjer för att felsöka en gelelektrofores metod när dina resultat är inte som förväntat . Detta är vad du behöver
kvalitetsklass bis : akrylamid eller prefabricerade plattor
Två glasplattor
Akrylamid : Bis
TBE -buffert ( TRIS , borsyra , EDTA ) katalog Strömförsörjning
Övre buffertkammare
Nedre buffertkammare
protein av DNA-prov
TEMED
Ammoniumpersulfat
Gel fläcken
Visa fler Instruktioner
1

Börja med det sista steget i gelelektrofores först och arbeta bakåt. För gelelektrofores, är det sista steget färgningsproceduren används för att observera provbanden. Några problem borde egentligen ske under färgningsproceduren . Emellertid bör pulveriserade fläckar vara väl upplöst i den lämpliga bufferten , innan de användes för att färga en gel. Fastställa den korrekta koncentrationen av färg användes .
2

Kontrollera strömförsörjningen . Frånvaron av banden skulle kunna indikera ström eller spänning inställningen var för hög och proverna migrerade bort gelen . Höga inställningar kan också orsaka provkomponenter för att migrera genom gelen för fort , vilket orsakar dålig upplösning och band som verkar orena . Proverna får inte migrera genom gelen om inställningen matningen är låg . Prover kan också driva från brunnen där de lastades och inte vandrar genom gelen . Addera 3

Kontrollera vätske akrylamid som används för att kasta polyakrylamidgel . Typiskt är den procentuella andelen av akrylamid används för att gjuta en polyakrylamidgel varierar från 5 till 15 procent . Prov som består av större molekyler lastas på en 5 procent gel , eftersom stora fragment gå långsammare på geler med en procentenhet högre akrylamid . Små molekyler lastas på en högre procent gel eftersom en gel koncentration låg inte skulle vara i stånd att lösa mindre prover .
4

Kontrollera de reagenser som används för att polymerisera akrylamid . En polyakrylamidgel bildas genom polymerisation av en flytande blandning bestående av bis-akrylamid och akrylamid. Ammoniumpersulfat och TEMED tillsätts till akrylamid för att katalysera gelbildning. Normalt bör akrylamid visa tecken på polymerisation ( gelbildning ) 15 minuter efter ammoniumpersulfat och TEMED tillkommit. Polymerisering som sker alltför snabbt är resultatet av höga mängder av ammoniumpersulfat . För lite ammoniumpersulfat kan orsaka ofullständig eller ojämn polymerisation .
5

Bekräfta mängden av proverna laddade . Höga koncentrationer av prover kan röra sig långsamt genom gelen och minska band upplösning . Ett provkoncentrationsom är låg kan inte observeras när gelen har målat . Dessa fläckar har begränsningar som att den minsta mängd prov som kan avbildas som en följd av fläckkänslighet.
6

Bekräfta kvaliteten på proverna laddade . Salter och andra föroreningar som är närvarande i ett prov kan påverka rörelsen av provet längs gelén. Elektrofores är resultatet av elektrisk ström som löper genom en gel som innehåller en strömledande buffert; höga saltkoncentrationer i provet kan påverka rörelsen av denna ström genom gelén . Din isolering av ett prov ska innehålla en renings kit som kommer att producera en relativt rent prov .
7

recension litteratur eller det skriftliga protokollet för att avgöra om den rätta PAGE användes för att genomföra experimentet . Den procentuella andelen av akrylamid i PAGE är specifik för storleken på det prov som skall testas. Litteraturen kan också ge specifik information avseende inrättas av strömförsörjningen och andelen prov migration . Addera

SHARE

Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom