Biotinylering Protocols

Biotinylering är arbetet med att knyta biotin eller vitamin H, till ett protein eller andra molekyler. Denna vetenskapligt förfarande används främst inom bioteknik och molekylärbiologisk forskning involverar DNA, proteiner och antigener, som är molekyler kroppens immunförsvar känner igen som inkräktare. Biotinylering protokoll innefattar biotinylering av antikroppar och peptider, samt cellytan biotinylering. Biotinylering av antikroppar

att länka biotin till antikroppar proteiner producerar när ett antigen kommer in i kroppen, tekniker använda natriumbikarbonat (NaHC03) vid pH 9, dimetylsulfoxid (DMSO),

NHS -biotin och en saltlösning ämne som kallas PBS. Prover blandas med natriumbikarbonat, som senare sätts till NHS-biotin i DMSO. Lösningen sätts sedan till de analyserade antikroppar och inkuberades på en apparat som kallas en rotator under fyra timmar vid rumstemperatur eller över natten vid 39,2 grader Fahrenheit. Slutligen, spädes lösningen med PBS.
Cellytan Biotinylering

cellytan biotinylering protokoll, tekniker använda vävnadsodling, fosfat-buffrad saltlösning (PBS) vid pH 7,4 och sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido) etyl-1 ,3-ditiopropionat buffertlösning för att balansera syra innehållande aminogrupper och TrisCl, enligt Current Protocols in celler Protein Science.The blandas med biotin och buffertlösning, dekanteras och centrifugeras . Solid innehåll och specifika proteiner senare analyseras på en gelelektrofores skylt.
Biotinylering av peptider

att utföra biotinyleringen av peptider, är det reagens som används NHS -SS biotin, enligt Philip Shepherd i "monoklonala antikropparna: A Practical Approach." Peptider är korta fragment av aminosyror, de molekyler i form av proteiner och DNA. I detta protokoll, är den kommersiella lösningen NHS-SS Biotin upplöst i vatten. Då peptiden Provet sätts till det, tillsammans med natriumbikarbonat för att balansera surhet eller pH. Lösningen inkuberas sedan på is under två timmar. Tekniker kan observera provet med eller utan biotinmolekyler.