Vidhäftande Cells Protokoll

Celler i odling är antingen en form odlas i suspensionen, såsom blodceller, eller celler såsom fibroblaster som kräver en yta på vilken de kan fästa. Några av ytorna kan kräva beläggning i olika extracellulära matriser beroende på celltyp och studier. Alla cellkulturer behöver utföras är aseptiska förhållanden. Optimal Environment

Majoriteten av celltyper kan odlas i Dulbeccos modifierade Eagles medium, (DMEM) eller Roswell Park Memorial Institute (RPMI) med tillsats av 10 procent fetalt kalvserum, 2 milimoles av aminosyran glutamin och antibiotika, till exempel, 100 enheter penicillin och 0,1 milligram per milliliter streptomycin. Celler upprätthålls i sina medier i en fuktad inkubator vid 37 grader Celsius och 5 procent koldioxid.
Splitting

Cellerna bör kontrolleras dagligen med avseende på infektion, död eller tillväxt . När vävnadskulturflaska är 80 procent belagda i celler bör cellerna delas att underhålla cellernas hälsa och log-fas av tillväxt. Media avlägsnas och cellerna tvättas i fosfatbuffrad saltlösning. Vidhäftande celler kräver tillsats av trypsin och etylendiamintetraättiksyra (EDTA) för att avlägsna proteiner celladhesion. Försiktig omröring bör avlägsna cellerna. Media bör läggas för att neutralisera trypsin /EDTA-lösning.
Odling

De utspädda celler och tryspin /EDTA-lösningen kan centrifugeras till pellets och tvätt cellerna. Cellerna kan åter-suspenderas i media och späddes och replated i nya kolvar. Varje gång cellerna dela upp celler passage nummer ökas med ett.
Media Change

Media bör bytas två gånger i veckan genom att ta bort de gamla medierna och ersätts med nytt, värmde media.