Skillnaden mellan Direkt och indirekt ELISA

En enzymkopplad immunabsorberande analys (ELISA) innefattar reaktion av en antikropp -enzym- komplex med en antigen eller antikropp som hölls orörlig på en fast yta . Vid inkubation av en enzym med ett lämpligt substrat , är en produkt bildas . Bildningen av en produkt bidrar till att detektera närvaron av antigenet eller antikroppen och dess mängd ger ett mått på den mängd antigen -antikroppsreaktion som inträffade . ELISA -test kan utföras i två former: direkt och indirekt . Testformat

direkt ELISA-test är en primär antikropp som hölls på väggarna i en mikrotiterplatta . När provet som misstänks innehålla antigenet tillsätts , det finns en antigen-antikroppsreaktion . Därefter är en enzymkopplad sekundär antikropp som har förmåga att reagera med antigenet tillsätts. Om antigen är närvarande i provet binder den till denna enzymbunden antikropp. När en färglös substrat tillsätts , om en färg utvecklas , indikerar det närvaron av antigen . I den indirekta ELISA , är antigen hålls på väggarna i mikrotiterplattan . När ett prov som misstänks innehålla antikroppar som tillsätts, uppträder en antigen-antikroppsreaktion . Därefter är en enzymkopplad sekundär antikropp med förmåga att reagera med den obundna regionen i antikroppen tillsätts. När det färglösa substratet tillsättes , leder det till utvecklingen av färg om provet som används innehåller antikroppar . Addera Ease of Testing

Ett stort urval av märkta sekundära antikroppar är kommersiellt tillgängliga. Dessutom är det möjligt att skapa flera primära antikroppar i en given art och använda samma sekundär antikropp för detektering. Detta gör den indirekta ELISA enkelt att utföra. I direkt ELISA , de primära antikropparna måste vara specifikt beredda för att reagera med den specifika antigenen som misstänks vara närvarande i provet . Detta gör det direkt ELISA ofördelaktig jämfört med det indirekta testet . Addera Snabbhet av Testa

direkt ELISA -test är snabb i jämförelse med den indirekta testet eftersom det använder endast en enda antikropp . Den indirekta ELISA kräver ett ytterligare steg av inkubation med en andra antikropp under testförfarandet, som orsakar en försening med att få resultat . Addera Känslighet

direkt ELISA -test är mindre känslig än indirekt form av testet , eftersom det är mycket mindre signalförstärkning . Dessutom kan märkningen av den primära antikroppen med ett enzym försämra dess immonoreactivity profilen . Vid den indirekta ELISA , är den primära antikroppen inte är märkta och därför behåller den sin immunreaktivitet . Dessutom har varje primär antikropp många epitoper som kan binda med den sekundära antikroppen , vilket möjliggör förstärkning av signalen , vilket förbättrar metodens känslighet. Det finns emellertid en risk för korsreaktivitet mellan antigenet och den sekundära antikroppen , vilket leder till ett fel i resultaten. Det finns ingen sådan möjlighet i den direkta ELISA- metoden . Addera