1. Home
  2. alternativ medicin
  3. biter Stings
  4. Cancer
  5. förhållanden Behandlingar
  6. Tandhälsa
  7. Diet Nutrition
  8. Family Health
  9. Sjukvård Industri
  10. Mental hälsa
  11. Folkhälsa säkerhet
  12. Verksamheten Verksamheten

Tissue Culture Tips

Vävnadskultur är förökning av celler i ett flytande odlingsmedium i labbet för olika vetenskapliga ändamål. Till exempel är vävnadskulturer används i diagnostik av genetiska sjukdomar , som ett medium för att odla intracellulära patogener som bakterier eller virus eller i utredningar av cellerna själva . Tissue Culture Celler

Vissa celler följer bottnarna av petriskålar eller förbli suspenderade i vätskan . Celler kan vara av vegetabiliskt eller animaliskt ursprung. Celler som används i vävnadskulturer kan vara primära celler , vilket innebär att de skördades direkt från en organism , eller av en cellinje som har hållits i kultur . Cellinjer är ofta cancerceller , och detta måste beaktas vid planering eller tolka experiment .
Behandla celler försiktigt

Adherenta celler avlägsnas från sin petriskål för passage genom skrapning eller med ett proteas , i allmänhet trypsin och EDTA. Skrapning dödar många celler och bör endast användas vid beredning cellysat ( flytande beredningar av cellinnehåll för analys ) eller när trypsin /EDTA absolut måste undvikas .

Trypsinizing avlägsnar inte bara de proteiner som fäster celler till skålen men de flesta andra proteiner på cellmembranet , för. Celler upp bollen och ta lite tid , oftast över natten , för att återupprätta en obligation med skålen . Lägga till en minimal mängd av trypsin - runt 1 ml för en 25cm2 kolv - gunga kolven under fem sekunder eller mindre till belägga monolager och sedan hälla bort eller aspirera överskottet trypsin kommer att minska mängden trypsin som monolager utsätts . Låt cellerna vila i inkubatorn under trypsinering .

Efter att cellerna glida av botten av skålen , tillsätt medier med serum och aspirera lysat upp och ner i pipett försiktigt . Tillåt lite media för att stanna kvar i skålen som du pipettera upp och ned flera gånger för att bryta sönder klumpar och få en jämn suspension.

Inte suga bubblor i pipett. Också, inte kraftigt blanda eller vortexblanda cellsuspensionen ; cellerna är mycket bräckliga i detta balled upp tillståndet . Addera Till Heat inaktivera eller inte värma Inaktivera

När cellodlingsteknikvar i sin linda , fetalt bovint serum ( FBS ) var känd för att innehålla komplementproteiner, som är immunsystemet proteiner som lyserar celler . Komplementproteiner är inte önskvärda i cellkultur. Värme inactivating FBS vid 56 ° C under 30 minuter kommer att göra komplementproteiner inaktiva . Förvärmningsanordning FBS till 37 grader C också är tillräckligt för att inaktivera komplementproteiner .

I början , värmeinaktiveFBS dödade också mykoplasma och andra föroreningar . Vid den tidpunkten blev filtersterilisering utfördes med 0.45um filter. Idag , vi filtrera sterilisera FBS och media genom 0.1um eller 0.04um filter . Ingen mykoplasma kommer att slinka igenom det

Detta lämnar oss med frågan om att inte värma inaktivt

Värmeinaktiveförsämrar alla komponenter i FBS - . . Som vitaminer , aminosyror och tillväxtfaktorer - . möjligen under tröskeln för några petiga cellinjer

Om du arbetar med en långsamt växande eller petiga cellinje , anser bara filtrera sterilisera dina FBS . Du kanske tycker att detta ökar robustheten i dina celler . Addera

SHARE

Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom