1. Home
  2. alternativ medicin
  3. biter Stings
  4. Cancer
  5. förhållanden Behandlingar
  6. Tandhälsa
  7. Diet Nutrition
  8. Family Health
  9. Sjukvård Industri
  10. Mental hälsa
  11. Folkhälsa säkerhet
  12. Verksamheten Verksamheten

T - Cell Culture protokoll

T- celler , som tillhör en familj av immunceller som kallas lymfocyter , genereras under ett adaptivt immunsvar . T- celler som härrör från benmärg och mognar i tymus . Det finns flera olika typer av T-celler, var och en med en annan funktion. T-celler kan särskiljas från varandra genom det bifogade T-cellantigenreceptor. En undergrupp av T-celler som bär CD4- markören och hjälper till att inducera ett immunsvar . Källor till T-celler

T-celler kan erhållas från olika källor, inklusive mjälte, lymfkörtlar och tymus, men perifert blod är den mest lättillgängliga källan för T-celler för odlingsändamål . Blodproversökts för infektioner och andra föroreningar och hanteras försiktigt under ett säkerhetsskåp . T- celler odlas av flera skäl , bland annat toxicitetsmätningar och att studera immunologiska vaccinsvar.
Isolering

T-celler vanligen separeras från helblod av densitet - gradient separation, såsom T-celler är mindre tät än röda blodkroppar , såsom erytrocyter och därför utvinns genom centrifugering. En lämplig neutral saltlösningensättes till blodprovet , följt av en FicoU Isopaque lösning. Ficoll- Isopaque har en densitet som är större än T-celler , men mindre än erytrocyter och under centrifugering bildar ett mittskikt mellan de båda cellerna , vilket gör att T-celler kan avlägsnas från toppen. De T-celler är ytterligare centrifugeras, supernatanten avlägsnas , och en liten alikvot räknas för att bestämma cellviabilitet . Cellerna används antingen direkt för experiment eller frysförvarade för framtida bruk .
Frysförvaring

Frysförvaring reagenser förbereds i förväg för att undvika nedbrytning T - cell på rummet temperatur. Om det inte är möjligt , är celler som förvaras på is eller i kylskåp . Reagens bestå av cellodlingsmedia och från 10 till 13 procent av humant serumalbumin (HSA )-protein , såväl som cellodlingsmedia och 10 procent dimetylsulfoxid (DMSO). DMSO minimerar uttorkning , förändringar pH och förändringar elektrolytkoncentration samband med frysning . T- celler återsuspenderas i reagensinnehållandecellodlingsmedia och HSA i ett cryotube . Reagenset innehållande DMSO tillsattes långsamt till cellerna och roterades försiktigt . Cellerna överföres därefter till en fryskärlet innehållande isopropanol för att säkerställa en gradvis minskning av temperaturen och lagras. Addera Upptining

När T-celler har tinats , en cryotube avlägsnas från lagret och inkuberades vid 37 grader Celsius. Därefter tillsätts det lämpliga upptining mediet långsamt till cellerna tills två gånger volymen uppnåtts , överfördes till ett separat rör och centrifugerades . Benzonase ibland tillsatt i upptining mediet för att förhindra hopklumpning av döda T-celler. Den centrifugerades pelleten reagerade i cellodlingsmedia och cellviabiliteten utvärderas . T-cellerna är sedan klar att använda för respektive experiment . Addera

SHARE

Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom