Kompetitiv bindningsanalys Protocol

Den konkurrerande bindningsanalys är ett experiment som bestämmer bindningsförmågan för proteiner eller kemikalier för specialiserade proteiner som finns på en cellyta , som kallas receptorer. Metoden används ofta i medicinsk forskning, men har också möjligheten att avgöra vilka läkemedel binder till receptorer och modifiera receptoraktivitet , vilket i sin tur kan förändra cellens beteende . Cellberedning

återsuspendera celler i iskall fosfatbuffrad saltlösning ( PBS). Mät proteinkoncentrationen för att bekräfta lika proteinnivåer genom att använda ett specialiserat kommersiellt tillgänglig proteinanalys .
Assay

Lägg en radioaktivitet -märkt protein som är känt för att binda till receptorn , den ligand , till cellen eller vävnaden suspension. Tillsätt konkurrent , som är det testade läkemedlet eller protein som studeras och inkubera med den radioaktiva liganden och cellsuspension. Ett område av koncentrationer av testläkemedlet bör studeras . Efter inkubation , separat bunden och obunden ligand och mäta radioaktivitet .
Dataanalys

Den vanliga åtgärden skall bestämmas är hälften av den maximala koncentration som hämmar receptorn annars känd som IC50 . Detta beräknas genom att plotta koncentrationerna på en logaritmisk skala på X-axeln av ett diagram medan Y-axeln representerar den procentuella andelen hämning , en sigmoid kurva , som är en S-form , bör genereras . IC50 är 50 procent inhibition punkten , och den motsvarande koncentrationen kan läsas från grafen .