NADPH-oxidas tillhör en familj av enzymer som hjälper till att elektronöverföring mellan NADPH och syre. Dock har NADPH oxidas en unik förmåga att producera reaktiva syreradikaler från denna reaktion, jämfört med övriga familjemedlemmar om reaktiva syreradikaler genereras via andra medel. Ett multimert proteinkomplex, NADPH-oxidas består av membranbunden flavocytochrome b558, som används som ett mått markör.
Reaktiva syreradikaler (ROS) Generation
As den främsta källan till ROS, särskilt väteperoxid producerar NADPH oxidas små men konsekventa mängder via dess isoform uttryckt i blodkärl, som är involverade i signaleringsprocesser. Denna konsekventa produktion kan så småningom överväldiga naturliga antioxidant systemet, vilket orsakar en förlust av skyddande ämnen såsom kväveoxid, och uppkomsten av ännu kraftfullare ROS.
Kemiluminescensmetod som
Chemiluminescence möjliggör mycket känslig, automatiserad mätning av NADPH oxidas aktivitet över ett intervall av koncentrationer. Under denna metod NADPH substrat tillsattes till ett vävnadsprov innehållande NADPH-oxidas. Vid reaktion, är ROS genereras och reagerar med föreningen lucigenin att producera en chemilluminescent effekt, som mäts. Luminescens är direkt proportionell mot NADPH-oxidas aktivitet, som enzym bestämmer reaktionshastigheten.
Kinetic Assay via flödescytometri
I denna metod är vävnadsprover analyseras via flödescytometri. Benmärg separeras från provet med användning av Hanks balanserade saltlösning. Specifika fläckar och detektion av antikroppar tillsätts till provet i polystyrenrör. Provet inkuberas därefter, tvättades med Hanks balanserade saltlösning, märkt med molekylära sönder och som framställs från flödescytometri. Kontrollrör görs även för jämförelse och för att kalibrera flödescytometer. Maskinen är sedan sprang och mätningar registreras.
Upphovsrätt © Liv och hälsa