Skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA

En enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) innefattar reaktion av en antikropp-enzym-komplex med en antigen eller antikropp höll orörlig på en fast yta. På inkubation av en enzym med ett lämpligt substrat, är en produkt bildas. Bildningen av en produkt hjälper till att upptäcka närvaron av antigenet eller antikroppen och dess mängd ger ett mått på mängden antigen-antikroppsreaktion som inträffade. ELISA-testet kan utföras på två sätt: direkt och indirekt. Test Format

I direkt ELISA-testet, är en primär antikropp som hölls på väggarna i en mikrotiterplatta. När provet misstänks innehålla antigenet tillsätts, det finns en antigen-antikroppsreaktion. Därefter är en enzymkopplad sekundär antikropp som har förmåga att reagera med antigenet tillsattes. Om antigen är närvarande i provet binder den till denna enzymbunden antikropp. När ett färglöst substrat tillsätts, om en färg utvecklas, indikerar det att närvaron av antigen. I den indirekta ELISA, är antigen hålls på väggarna i mikrotiterplattan. När ett prov som misstänks innehålla antikroppar tillsätts, uppträder en antigen-antikroppsreaktion. Därefter är en enzymkopplad sekundär antikropp med förmåga att reagera med den obundna regionen i antikroppen tillsattes. När den färglösa substrat tillsätts, leder det till utveckling av färg om provet som används innehåller antikroppar.
Ease of Testing

Ett brett utbud av märkta sekundära antikroppar är kommersiellt tillgängliga. Dessutom är det möjligt att skapa flera primära antikroppar i en given art och använda samma sekundära antikroppen för detektion. Detta gör den indirekta ELISA lätt att utföra. I direkt ELISA, de primära antikropparna måste vara särskilt beredd att reagera med det specifika antigenet som misstänks vara närvarande i provet. Detta gör det direkt ELISA ofördelaktig jämfört med det indirekta testet. Addera ditt Snabbhet av att testa

direkt ELISA-testet är snabb i jämförelse med den indirekta testet eftersom det använder endast en enda antikropp. Den indirekta ELISA kräver ett ytterligare steg av inkubation med en andra antikropp under provningen, vilket orsakar en fördröjning i att nå resultat.
Känslighet

direkt ELISA-testet är mindre känslig än indirekt form av testet eftersom det finns mycket mindre signalförstärkning. Dessutom får märkningen av den primära antikroppen med ett enzym försämra dess immonoreactivity profil. Vid den indirekta ELISA, är den primära antikroppen inte märkt, och därför behåller den sin immunreaktivitet. Dessutom har varje primär antikropp många epitoper som kan binda med den sekundära antikroppen, vilket medger förstärkning av signalen, vilket förbättrar metodens känslighet. Det finns dock en risk för korsreaktivitet mellan antigenet och den sekundära antikroppen, vilket leder till ett fel i resultaten. Det finns ingen sådan möjlighet i den direkta ELISA-metoden.