1. Home
  2. alternativ medicin
  3. biter Stings
  4. Cancer
  5. förhållanden Behandlingar
  6. Tandhälsa
  7. Diet Nutrition
  8. Family Health
  9. Sjukvård Industri
  10. Mental hälsa
  11. Folkhälsa säkerhet
  12. Verksamheten Verksamheten

Cell Lysis protokoll för proteinisolering

Små proteiner kan framställas syntetiskt , men av många skäl finns det ingen syntetisk maskiner bättre än själva cellen . Typiskt är det första steget i proteinisolering cellys . Cell Lysis
I cellys membranet runt cellen spricker.

Ordet " lys " kommer från ett grekiskt rot som betyder " att lossna . " I cellys , är de krafter som håller cellmembranet tillsammans störd, orsakar det att brista. Innehållet i cellen frigörs sedan in i den omgivande lösningen , inklusive proteinet av intresse . Oftast sker detta genom tillsats av en kemisk lösning som kallas lysbuffert . Addera Förberedelse Lysis Buffer
val av lysbuffert kommer att bero på celltypen , proteinet och tillämpning .

En myriad av olika lyseringslösningarär kommersiellt tillgängliga , eller gemensamma recept kan användas för framställning av lysbuffert från vanliga kemikalier . Den bästa buffert att använda kommer att variera beroende på celltypen som används , det protein som skall isoleras och den slutliga tillämpningen , men i allmänhet innehåller en lyslösning en detergent -molekyl (ofta NP- 40 eller Triton-X ), som upplöser cell membranet , tillsammans med buffertar, kelatorer och proteasinhibitorer för att förhindra proteinet från att skadas när frisatta från den skyddande miljön i cellen.

lysis Förhållanden
Performing lys enligt iskalla betingelser förhindrar skador på proteinet av intresse.

Lysbuffert används vanligen iskall och lyseringsprocessenfår fortgå under kalla förhållanden . Lösningen försiktigt vaggas för att uppmuntra jämn fördelning av celler och lyseringsprodukter . Efter ca 5 till 10 minuter , är lyslösning vanligtvis neutraliseras för att förhindra ytterligare aktivitet. Dessa försiktighetsåtgärder minska skador på proteinet och minska mängden främmande partiklar som produceras som senare måste avlägsnas . Addera Andra Lysis Metoder
Mekanisk kraft kan också användas för att lysera cellerna.

Även kemisk lys är den mildaste och mest använda , kan hårdare mekaniska metoder för att lysera celler användas i vissa fall . Dessa innefattar sonikering, upprepade frysnings -upptiningscykler och homogenisering , vilket är ett mäskprocessen . Konsultera den tekniska litteraturen för att hitta den lämpligaste metoden för ditt specifika fall . Addera

SHARE

Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom