Hur man gör LB-agarplattor

Agar är en geléartad substans , tillverkad av rödalger och används för olika ändamål . En av dess vanligaste användningsområdena är som ett odlingsmedium för bakterier . LB-agar är näringsagar som har kombinerats med lysogeny buljong ( LB ) . Det är en vedertagen felslut som LB står för Luria - Bertani . Men dess uppfinnare , Giuseppe Bertani , konstaterar i sin uppsats " Lysogeny vid mitten av nittonhundratalet : P1 , P2 , och andra experimentella system , " att initialerna alltid var avsedda att stå för lysogeny buljong , inte hans namn , och det av hans coresearcher , Salvador Luria . LB-agar är mångsidig och ganska enkelt att göra . Du behöver Hus Till 1 L färdig medium:
Skala och väger papper eller brickor
1 - L mätglas
1 L destillerat eller avjoniserat vatten
2 - L E-kolv
10 g trypton
5 g jästextrakt
5 g noniodized bordssalt
15 g agar
Aluminiumfolie
Vattentät ugn vantar
Autoklav eller tryckkokare
Steril Petri plattor
Visa fler Instruktioner
1 Använd en Erlenmeyerkolv som rymmer två gånger volymen av det medium du tänker förbereda .

Placera trypton , jästextrakt och salt i Erlenmeyerkolv .
2 Var uppmärksam på trycket i autoklaven eller tryckkokaren vid sterilisering .

Till destillerat eller avjoniserat vatten och sir eller skaka för att lösa de flesta av de torra ingredienserna . Addera 3

Tillsätt agar och fortsätter att skaka eller rör om. Samtliga agar löses inte upp , men det är viktigt att du får det mesta av det i lösning . Undvik stora klumpar av oupplöst agar bosätta sig i botten av din kolv .
4

Täta öppningen av kolven med folie .
5

Placera kolven i en autoklav - säkra behållare.
6

Häll ca 1 cm vatten i behållaren.
7

Sätt behållaren och kolven i autoklaven . Ställ autoklav under en vätskecykeloch sterilisera i minst 20 minuter. Om du använder en tryckkokare för sterilisering , gå till steg 8 . Annars går du till steg 10 .
8 p Om du använder en tryckkokare , placera en liten mängd vatten i spisen och placera kolven i vattnet . Försök inte att sterilisera mer än 250 ml i taget med den här metoden .
9

Ta tryckkokaren till ca 20 psi och sterilisera i ca 30 minuter .
10 < p > ta kolven ur autoklaven eller tryckkokaren , ta hand som kolven kommer att vara ganska varmt .
11

Snurra flaskan försiktigt när steriliseringen är klar . Detta kommer att distribuera den agar jämnare i din lösning .
12

Sätt kolven på en lämplig yta och låt den svalna lite . Om du har förberett 1 L eller flera av medium, ge det en mild virvel var 10 till 20 minuter . Du kommer att kunna berätta att mediet har svalnat tillräckligt när du kan hålla på baksidan av fingrarna mot kolven i ca 2 sekunder utan att det är obehagligt varm vid beröring . Vänta cirka 15 till 20 minuter innan du försöker detta .
13

Placera en petriskål på en plan yta . Lyft försiktigt på locket i en vinkel , så att det mesta av skålen är kvar täckt . Lyft inte locket rakt av plattan .
14

Häll mediet från kolven i petriskålen tills skålen är ungefär halvfull .
15

omedelbart ersätta locket , flytta plattan åt sidan och gå vidare till nästa tills alla önskade plåtar har fyllts . Plattorna kommer att slutföra sin stelning i ca 30 minuter .
16

Placera petriskålar i den sterila påsen där de anlände eller annan lämplig , steril behållare om du inte ympa dem direkt. Förslut behållaren för att bevara fukt. Märk plattorna om så önskas. Om du lagrar plattorna , bör de förvaras vid en temperatur av ca 39 till 40 grader C. Addera