1. Home
  2. alternativ medicin
  3. biter Stings
  4. Cancer
  5. förhållanden Behandlingar
  6. Tandhälsa
  7. Diet Nutrition
  8. Family Health
  9. Sjukvård Industri
  10. Mental hälsa
  11. Folkhälsa säkerhet
  12. Verksamheten Verksamheten

Hur man mäter NADH

NAD och NADH är båda pyridinnukleotider involverade i ämnesomsättningen . NADH och NAD är co- enzymer som finns i mitokondrierna , kraftstationerna av cellen. Både NAD och NADH är involverade i cellulära reaktioner såsom andning och fotosyntes , där energi och vätgas genereras . NAD och NADH bränsle biokemiska reaktioner som kräver ett antal enzymer för att producera ATP , den viktigaste energikällani celler . Detta är vad du behöver
celler eller vävnad som studeras
NADH analyssats
Fosfat - saltlösning
Kolsyreis
Värme blocket
96 brunnar
Centrifug
Märkt tuber
Plattläsare
Vortex
Känd koncentration av NADH
Visa fler Instruktioner
analys
1

Tvätta cellerna eller vävnad som studeras med kall fosfat salin , PBS. Extrahera cellerna eller bryta upp vävnad i extraktionsbuffert genom att placera blandningen på torr is under 20 minuter och därefter vid rumstemperatur under 10 minuter. Upprepa .
2

Vortex i 10 sekunder . Centrifugera i en centrifug under 5 minuter för att pelletera celler eller vävnadsrester . Avlägsna supernatanten , vätskefas, och placera vätskan i ett rent rör . Addera 3

Filtrera supernatanten genom ett specialiserat filter för avlägsnande av enzymer som kommer att fördelningen NADH.
4

Ta bort 200 mikroliter , rum i ett rent rör och värme på 60 grader i värmeblock i 30 minuter för att denaturera NAD . Kyl och centrifugera och ta bort vätskefasen . Överför 50 mikroliter i en 96 -brunnars platta ; Varje prov ska vara i två eller tre exemplar . För att bestämma total NAD , NADt , inte värmer .
5

Förbered och lägg cykling mix i 96 -brunnar . Blanda och inkubera under 5 minuter. Tillsätt 10 mikroliter av framkallare och låt inkubera vid rumstemperatur i upp till 4 timmar. Lägg samlad lösning . Läs färgförändring på en plattläsareeller fluorimeter beroende på kit .
Standardkurva och Beräkning
6

Bered en standardkurva genom att ta en känd koncentration av NADH och späda den i extraktionsbuffert . Späd i olika koncentrationer , se till att slutvolymenär densamma som testprov. Plate på samma 96 -brunnsplatta som testprover. Läs optisk densitet .
7

Rita standardkurva grafen med koncentration på X-axeln och optisk densitet på Y-axeln . Ta ett medelvärde av varje testprov och läsa av koncentrationen från standardkurvan grafen.
8

Beräkna NAD /NADH- förhållandet genom att subtrahera totala NAD , NADt , från NADH och därefter division med NADH. < Br > Addera

SHARE

Upphovsrätt © Hälsa och Sjukdom