Hur kan jag rada upp DNA för analys

? Agarosgelelektrofores är den vanligaste metoden för visuell DNA fragmentanalys , vilket gör att tekniker för att visuellt urskilja DNA-fragment som baseras på storlek . Agarosgelen sustains ett magnetfält och , eftersom DNA har en negativ laddning , flyttar den mot den positiva änden av det magnetiska fältet. De mindre DNA-fragmenten rör sig snabbare genom gelén och större fragment rör sig långsammare . DNA-fragmenten fluorescerande färgas med ett interkalerande medel känt såsom etidiumbromid. Detta möjliggör jämförelse av flera elektrofores DNA-prover på en gel. Detta är vad du behöver
Agarosgel , 0,7 procent till 2 procent
Tris - borat - EDTA ( TBA ) , tris - acetat - EDTA ( TAE ) , natrium- litium -acetat ( LA ) , borsyra ( SB ) buffert
Etidiumbromid
gelpåföringsfärgämne
Gel bricka
Elektrofores kammar
Handskar
skyddsglasögon
pipett
Elektrofores kam
Visa fler Instruktioner
Förbereda en 0,7 procent agarosgel
1

Väg upp 0,7 g agaros pulver och sedan placera in i en stor ( 250 ml ) E-kolv .
2

Lägg 100ml av en 1X ( vanlig styrka ) buffert ( TAE , TBE , SB eller LB buffert ) till kolven med agarospulver . Addera 3

Mikrovågsugn eller värme med hjälp av en bunsenbrännare för cirka en minut tills lösningen blir klar och agarosen har lösts .
4

Ta kolven från värmekällan och låt det svalna till 55 till 60 grader Celsius .
5

Lägg till ett mikroliter ( mikroliter ) av etidiumbromid till den kylda agaroslösningen med hjälp av en lämplig storlek pipett , vanligtvis 1 ml . Virvla lösningen för att blanda .
6

Häll gelen långsamt i gelen facket , se till det finns ingen bubbelbildningunder denna process . Om det inte finns några medföljande väl dammar med gelen facket , använd maskeringstejp för att bilda dem .
7

Placera en elektrofores kam försiktigt in gelen , vilket garanterar ett fast läge och i rätt riktning . Elektrofores kammar kan variera mycket på antalet tänder som de har. Tillåt gelén att ställa in under ca 25 minuter
8

Sänk gelén i samma buffert användes för att framställa agaorse lösning - . I detta fall , en 1X- buffert. Sänk ner gelen i upp till 5 ml löpande buffert .
Förberedelse och lastning av DNA i agarosgelen för analys
9

Överför 5-10 mikroliter av ditt prov ( er) från deras reaktionsrörentill nya rör . I det fall som du vill använda hela reaktionsblandningen , är ett nytt rör inte nödvändigt .
10

till 0,2 X buffert för alla dina färska provrör som innehåller ditt DNA-prov för lastning .

11

Avlägsna elektrofores kammen långsamt , se till att du inte bryter gelen eller skapa något utrymme mellan botten av gelen och gelen facket .
12

till fem till 12 mikroliter av en lämplig DNA-markör till den första brunnen som skapas genom elektrofores kam. Oavsett om en DNA-markör är lämplig beror på storleken av fragmenten du förväntar från ditt prov .
13

Load fem till 10 mikroliter av dina prover i de återstående brunnarna och tillsätt en lika mängd av samma DNA-markör i den sista också.
14

Placera elektroderna i elektroforeskammarengenom att ansluta kablarna i rätt uttag in i kammaren och ställa elektroden till 50 till 150 V.

15

Låt gelen köra för en till fyra timmar .
analys av resultat
16

bort gelen från gelen kammaren och placera den antingen i ett UV- rum för visuell identifiering , eller plats i en maskin som kan ta ett fotografi av gelen .
17

Mät markörer avstånd av migration i sina brunnar .

18

rita avstånden mot storleken på banden på semilog rutat papper och rita en bäst anpassad linje .
19

Beräkna avstånden i din okända band .

20

Uppskatta storleken på din okända band genom att dra en linje upp från den sträcka som dina okända band som möter linjen för bästa passform .
21

Rita en annan linje från denna mötesplats över till storleken axeln . Addera