OptiPrep är det kommersiella namnet på en steril lösning innehållande 60 procent jodixanol, en kemikalie som ursprungligen utvecklades som röntgenkontrastmedel. Lösningen har en mycket låg halt av endotoxiner – strukturella molekyler från bakterier som kan kännetecknas av kroppens immunförsvar. Det norska företaget Axis-Shield producerar lösningen, som är allmänt använd inom biomedicinsk forskning, bland annat för att studera cellers membrantransport av ämnen samt inom virus- och bakteriegenetik.
Nedan beskrivs tre vanligt förekommande protokoll för framställning av OptiPrep-gradienter: ett allmänt protokoll med natriumklorid, ett protokoll för HPV-studier samt ett protokoll för isolering av dendritiska celler.
Det allmänna OptiPrep-protokollet med natriumklorid använder natriumklorid som osmotisk balanserare, vilket håller lösningens koncentration i jämvikt. Tekniker framställer en arbetslösning med 50 procent jodixanol genom att späda OptiPrep med ett standardspädningsmedium. Därefter tillsätts 0,85 procent natriumklorid, alternativt 0,25 molar sackaros, samt Tris-hydroklorid vid pH 7,4 i gradientblandningen.
Enligt Axis-Shield har makromolekyler traditionellt renats i gradienter med höga koncentrationer av sackaros, glycerol, alkalimetallsalter eller tungmetallsalter. OptiPrep erbjuder ett alternativ som möjliggör isolering av makromolekyler i betydligt mer utspädda lösningar, vilket kan vara skonsammare för känsliga prover.
HPV, humant papillomvirus, angriper kroppens slemhinnor och orsakar köns vårtor och sår som i vissa fall kan utvecklas till tumörer. OptiPrep-protokollet för HPV avser studier av virusets genetiska material och omfattar framställning av OptiPrep-gradienter.
Tekniker framställer en gradientblandning med 46 procent OptiPrep genom att blanda följande komponenter:
Blandningen måste skyddas från ljus och kan förvaras i rumstemperatur i upp till två månader.
Dendritiska celler ingår i däggdjurens immunsystem och finns ofta i vävnader nära huden samt i slemhinnan i vissa organ, exempelvis magsäck och tarmar. Vid isolering av dessa celler används OptiPrep-lösning enligt ett särskilt protokoll.
Tekniker blandar OptiPrep i en lösning bestående av åtta procent natriumklorid, Tricin-buffert vid pH 7,4 samt etylendiamintetraättiksyra (EDTA). Den färdiga gradientblandningen kan förvaras i upp till en månad vid kyltemperatur, cirka 4 grader Celsius (39,2 grader Fahrenheit).
OptiPrep-gradienter erbjuder flexibla och skonsamma metoder för separering och isolering inom biomedicinsk forskning. Oavsett om syftet är att rena makromolekyler, studera HPV:s genetiska material eller isolera dendritiska celler, är korrekt framställning, skydd från ljus och rätt förvaring avgörande för resultatets kvalitet.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online