Ribonukleinsyra, eller RNA, är en central genetisk komponent i celler och extraheras ofta av forskare som genomför komplexa genetiska experiment. Denna process kallas RNA-isolering. Ett särskilt slag av RNA, mRNA (budbärar-RNA), utgör endast 1 till 5 procent av en cells totala RNA-mängd och är därför särskilt värdefullt för forskare.
Historiskt har det varit svårt att effektivt isolera mRNA från prokaryota organismer som bakterier, på grund av de bindningstekniker som traditionellt använts. Tack vare nyare tekniska framsteg finns det dock numera laboratoriekit som möjliggör isolering av bakteriellt mRNA med högt utbyte.
Välj rätt metod för att sönderdela bakteriecellerna. Den bästa metoden beror på vilka celler du arbetar med. Om cellväggarna är hårda bör du finfördela cellmaterialet noggrant för att säkerställa att alla cellväggar bryts ner. Soniska metoder eller skakningsmetoder fungerar däremot utmärkt för vätskor eller halvfasta vävnader.
Använd en denaturerande lösning direkt efter disruptionen. Placera omedelbart det sönderdelade cellmaterialet i kontakt med en denaturerande lösning för att påbörja nedbrytningen och avlägsnandet av genetiskt material. Tid är avgörande i detta steg, eftersom genetiskt material som DNA och RNA sönderfaller mycket snabbt. Observera att vissa typer av denatureringslösningar passar bättre för olika slags cellmaterial, och att det finns lösningar som är speciellt utformade för att förhindra nedbrytning av genetiskt material – dessa ger dig längre tid på dig att utföra isoleringen.
Isolera mRNA:t med ett specialiserat kit. Använd ditt kit för isolering av bakteriellt mRNA för att separera mRNA:t från provet. Med de flesta kit är detta en enkel och användarvänlig process, och bara några timmar senare har du ett rent prov av bakteriellt mRNA som är redo att användas för identifiering eller vidare experiment.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online