Hur man förbereder agarplattor

Molekylärbiologi och bakteriologi använder agarplattor till kultur mikroorganismer såsom bakterier för experiment. Den agar är agenten som stelnar, eller geler, ett flytande näringsmedium som krävs av mikroorganismen att överleva och växa. När överföras till en agarplatta, bakterierna växa i distinkta kolonier (om odlas i låga koncentrationer) eller fläckar (om odlas vid höga koncentrationer) och kan skördas för analys. Biologer förbereda agarplattor, eftersom processen kräver tillgång till laboratorium-grade reagenser och maskiner samt en god förståelse för molekylärbiologi och sterila tekniker. Saker du behöver
Handskar
Laboratorierock
Ansiktsmask
Bunsenbrännare
laminärflödeshuv
Steril petri
10g baktotrypton
5g jästextrakt
15g agaros
1 mL 1 N NaOH
sterilt destillerat vatten
glasflaska
Autoklav band
Autoklav
Kosttillskott, t.ex. antibiotika såsom ampicillin
Visa fler instruktioner
1

Sätt på korrekt skyddsutrustning, inklusive handskar, skyddsrock och en ansiktsmask, och sanera alla ytor. Arbete bredvid en Bunsen-brännare eller företrädesvis i en steril huv med laminärt flöde. Detta förhindrar att luftburna föroreningar från att falla in i agar.
2

Ta bort bunten med petriskålar från sin förpackning men spara för ompackning av agarplattor. Märk den yttre ytan av skålen (inte locket) med den typ av agar och med datum för beredning. Låg plåtarna ut som ett enda skikt med locken borttagna för att göra hälla av agar lättare.
3

Blanda baktotrypton, jästextrakt och agaros tillsammans och tillsätt sedan natriumhydroxid (NaOH)-lösning. Lägg sterilt destillerat vatten för att erhålla 1 liter näringsmedium. Överför denna lösning till en glasflaska med minst 1.5L volym. Skruva löst på locket på flaskan och ange datum för preparatet och namnet på medierna. Placera en remsa av autoklav tejp på flaskan och autoklav det i 25 minuter. Låt flaskan svalna till lägst 45 grader Celsius (eller det kommer att hårdna i förtid) men inte högre än 50 grader Celsius. Du kan lagra flaskor av kylda och stelnade agar vid 4 grader Celsius och sedan varma tills flytande. Om det behövs för just ditt experiment eller stam av bakterier, tillsätt lämplig typ och mängd av supplement såsom antibiotika. Om materialet är för varmt, kommer tilläggen att förstöras, så noggrant kontrollera temperaturen i media innan du fortsätter.
4

Häll en tillräcklig mängd agar till halv fyll skålen medan agar är fortfarande varm och flytande. Säkerställ att ytarean är helt täckt. Häll inte för mycket eller låta agar nå toppen av skålen. Förvara plattorna i en steril atmosfär genom att tillåta Bunsenbrännare eller huv med laminärt flöde för att köras kontinuerligt. Låt plattorna för att ställa in och sedan ersätta locken.
5

Torka agarplattorna i ca 30 minuter till en timme i en ugn inställd på högst 37 grader Celsius. Alternativt, kan du lämna dem i laminärt flöde huva i tre minuter eller på ett sanerat laboratoriebänk i en låg-trafik område som inte är dragig för en dag eller två. Torkning plattorna stannar någon bakteriell lösning placeras på agarytan från att helt enkelt späda ut och glider av, i stället för att bilda kolonier som fastnar på agar.
6

försiktigt förvara plattorna i mörker och vid 4 grader Celsius. Stapla de torkade agarplattor med sina bottnar upp så att du kan tydligt se etiketterna och förhindra mikroorganismer och skräp från att falla ut på agar yta och förorena dem. Sätt rätter tillbaka i sina förpackningar, täck med aluminiumfolie och tejp förpackningen stängd. Märk packade plattorna med deras innehåll och datum för beredning. Du kan lagra plattorna i upp till två månader och ska kasta dem efter det.