Immunofluorescens (IF) använder fluorescensmärkta antikroppar för att visualisera antigen. Märkningsstrategin definierar känslighet, flexibilitet och kostnad.
Direkt IF (DIF)
- Primär antikropp direkt konjugerad till fluorofor.
- 1-stegs protokoll; snabbare.
- Lägre signal (1 fluor/antikropp).
- Högre bakgrund om primär binder icke-specifikt.
- Begränsad multiplexing (varje primär behöver unik fluor).
Indirekt IF (IIF)
- Omärkt primär + fluorofor-konjugerad sekundär (anti-art IgG).
- 2-stegs protokoll.
- Signalförstärkning: Flera sekunder binder en primär → 5–10× starkare signal.
- Högre känslighet: Detekterar låguttryckta antigen.
- Flexibilitet: En sekundär fungerar för alla primärer av samma värdart. Byt fluoroforer för multiplexing.
- Lägre bakgrund: Sekundär binder inte provantigen direkt.
- Kostnadseffektiv: Sekunder billiga/återanvändbara; primär konjugering dyr.
Jämförelsetabell
| Egenskap | Direkt | Indirekt |
|---|
| Steg | 1 | 2 |
| Känslighet | Lägre | Högre (förstärkt) |
| Multiplexing | Begränsad | Enkel (artsspecifika 2:a) |
| Bakgrund | Högre risk | Lägre |
| Kostnad per analys | Högre (konjugerade primärer) | Lägre (delade sekunder) |
| Tid | Kortare | Längre (inkubation + tvätt) |
När du ska använda vilken
- DIF: Höguttryckta antigen, snabb screening, flödescytometri (där förstärkning inte behövs), validerade kliniska analyser.
- IIF: Forskning, låguttryckta mål, multiplex-paneler, ANA/ANCA diagnostik, vävnadsfärgning.
