Noggrann blodcellsräkning med hematocytometer kräver korrekt utspädning – använd aldrig koncentrerat blod. Koncentrerade prover orsakar cellöverlapp, klumpning och räkningsfel. Standardutspädningsförhållanden säkerställer att celler är jämnt fördelade i räkningskammaren.
Röd blodkroppsräkning (RBC)
Utspädning
- Standardutspädning: 1:200 (1 del blod + 199 delar utspädningsvätska)
- Utspädningsvätska: Hayems lösning, Gowers lösning, eller isotonisk saltlösning med fixativ
- Blanda grundligt efter utspädning
Inläsning & Räkning
- Placera täckglas på hematocytometer (Neubauer eller förbättrad Neubauer kammare).
- Applicera utspädd prov vid täckglaskanten – kapillärverkan fyller kammaren.
- Låt celler sedimentera 1–2 minuter.
- Under mikroskop (10× objektiv), räkna RBC i de 5 stora hörnhörnorna (var 1 mm², uppdelat i 16 små rutor).
- Använd räkningsregler: inkludera celler som rör övre/vänstra linjer; exkludera de som rör undre/högra linjer.
Beräkning
RBC-antal (celler/µL) = (Totala celler räknade i 5 rutor) × 10 000
Härledning: utspädningsfaktor 200 × kammardjup 0,1 mm × area 1 mm² × 5 rutor = 10 000
Vit blodkroppsräkning (WBC)
Utspädning
- Standardutspädning: 1:20 (1 del blod + 19 delar utspädningsvätska)
- Utspädningsvätska: Turks lösning (ättiksyra + gentianaviolett) lyser RBC och färgar WBC-kärnor
Inläsning & Räkning
- Ladda utspädd prov i hematocytometer som ovan.
- Räkna WBC i de 4 stora hörnrutorna (1 mm² var).
- Differentiera celltyper vid manuell differensiering (neutrofiler, limfocyter, monocyter, eosinofiler, basofiler).
Beräkning
WBC-antal (celler/µL) = (Totala celler räknade i 4 rutor) × 50
Härledning: utspädningsfaktor 20 × kammardjup 0,1 mm × area 1 mm² × 4 rutor = 50
Kritiska kvalitetspunkter
- Använd ren, torr hematocytometer och täckglas – inget skräp eller revor.
- Säkerställ korrekt blandning innan inläsning; undvik bubblor.
- Räkna minst 100 celler per celltyp för statistisk tillförlitlighet.
- Följ tillverkarens instruktioner och laboratoriets SOPs.
- Automatiserade analysatorer har i stort sett ersatt manuella räkningar men hematocytometri förblir referensmetod för validering.
