Intracellulär färgning protokoll för flödescytometri

Flödescytometri är ett verktyg som är användbart i studiet av cellproteiner . Den utnyttjar den emission av ljus eller fluorescens från de proteiner inom cellen. Antikroppar eller sonder taggade med fluorescens används för att studera specifika proteiner . Flödescytometri används för att diagnostisera ett antal sjukdomar , inklusive cancer, men är också användbar vid medicinsk forskning. Fäst celler

Celler bör fastställas för att upprätthålla stabiliteten i de intracellulära proteiner . Ett antal fixeringsmedel kan användas såsom formaldehyd eller iskall aceton. Efter fixering måste cellmembranet som skall permealized att tillåta antikropps att komma in i cellen. Detergenter såsom Triton eller NP- 40 kan eller iskall metanol användas för att göra hål i cellmembranet .

Färgnings

Tvätta cellerna i blockeringsbuffert 0,5 procent bovinserumalbumin späddes i fosfatbuffrad saltlösning, BSA /PBS. Celler inkuberas i blockeringsbuffert för att minska ospecifik bindning. Lägg primär antikropp utspädd i blockeringsbuffert och låt inkubera vid rumstemperatur , för optimerad tidslängd. Tvätta med blockeringsbuffert. Addera Analys

Inkubera den sekundära antikroppen , som är märkt med en fluorescerande etikett, vid rumstemperatur under 30 minuter. Att avlägsna obunden antikropp tvätt celler i blockeringsbuffert. Spin celler i en pellet och sedan resuspendera i PBS och analysera på flödescytometer . Addera