Inom forskningen behöver vetenskapsmän ofta stelna biologiska prover för att kunna skära dem i tunna snitt. Detta underlättar tillförandet av färgämnen, antikroppar och probor till provet, samtidigt som överlappning mellan olika cellskikt minskas. Paraffin används som hårt matris vid skärningen eftersom det inte blandas med vatten – paraffin är nämligen en typ av kolväte. Eftersom biologiska prover innehåller vatten måste de först dehydratiseras med hjälp av etanolbad med successivt ökande koncentration.
Etanolen avlägsnas med xylen, varefter smält paraffinvax används för att avlägsna xylen. För ljusmikroskopi är paraffinsnitten vanligtvis fem mikrometer tjocka, eftersom paraffinvaxet inte är hårt nog för tunnare snitt. Vävnaden återfuktas genom att först behandlas med xylen och därefter etanol. Till sist sköljs det biologiska provet med destillerat vatten för att undvika kontaminering.
Paraffininbäddade vävnader fixeras vanligtvis med neutralbuffrad formalin, den kommersiella varianten av formaldehyd. Den innehåller paraformaldehyd och metanol, vilket hindrar formaldehyden från att omvandlas till myrsyra. Tunt skurna vävnader kräver 48 timmars fixering i rumstemperatur för optimal histologi, det vill säga studiet av mikroskopisk anatomi. Annars riskerar vävnaden att härdas och bli spröd. Före bearbetning förvaras vävnaden vanligtvis i 70-procentig etanol vid en temperatur på 4 grader Celsius.
Forskare använder ofta paraffinprocessorer för att föra vävnaden genom bad som gradvis dehydratiserar materialet, innan hett paraffin kan tränga in i vävnaden. Processorn körs vanligtvis över natten. Den värmer endast vävnaden under en viss tid beroende på vävnadstyp, så att den inte blir hård och spröd. Processorn använder dessutom ett vakuum som snabbar upp paraffinets penetration och avlägsnar luftbubblor. När bearbetningen är klar förvaras vävnaderna i kassetter i rumstemperatur.
Paraffinet smälts en timme innan vävnaden tillsätts. Hela kassetten placeras därefter i ett paraffinbad på 65 grader Celsius i 15 minuter. En kall aluminiumvärmeavledare kyler sedan paraffinvaxet i 20 minuter. Om vaxet spricker eller om vävnaderna inte ligger korrekt tillrättalagda, smälter forskaren paraffinet och upprepar hela processen.
Vid snittning av vävnaderna håller forskaren vattenbadet på 35 till 37 grader Celsius. Vattnet ska vara färskt och avjoniserat. Blocken placeras med framsidan nedåt på ett isblock eller en värmeavledare i 10 minuter. Därefter skär en kniv blocket i tunna snitt. Två vanliga problem som kan uppstå är dålig bandbildning och sönderfallande preparat. När preparaten faller sönder är vattnet för varmt. Bandar blocket inte bra bör det läggas tillbaka på isblocket så att vaxet stelnar ordentligt innan du försöker igen.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online