```html
Amylas är ett enzym som bildas i bukspottkörteln och i spottkörtlarna och som hjälper kroppen att bryta ner och bearbeta kolhydrater. När bukspottkörteln drabbas av sjukdom läcker amylas ut i blodet. Har en patient besvär från matsmältningen eller misstänkt sjukdom i bukspottkörteln beställer läkaren därför ofta ett blodprov för att fastställa nivån av amylas i blodet. Genom att följa amylasnivåerna över tid får man värdefull information om sjukdomens utveckling och om hur effektiv behandlingen är.
Nedan beskrivs en laboratoriemetod där amylaskoncentrationen bestäms med hjälp av en UV/Vis-spektrofotometer. Metoden går ut på att först skapa en standardkurva för stärkelse och därefter mäta hur snabbt amylaset i ett plasmaprover bryter ner stärkelsen.
Det här behöver du
- UV/Vis-spektrofotometer
- 15 stora provrör
- Provrörsställ
- Stärkelselösning, 1 mg/ml
- Avjoniserat vatten
- KI/jodreagens
- Pipetter
- Droppare
- Tissue
- Kyvetter
- Millimeterpapper
- Blodprov
- Centrifug
- Stoppur
Instruktioner
Del 1: Skapa en standardkurva för stärkelse
- Sätt på spektrofotometern och ställ in våglängden på 620 nm. Låt instrumentet värmas upp i minst 10 minuter så att responsen hålls stabil under hela experimentet.
- Ställ fram sex provrör, numrera dem 1–6 och placera dem i ett provrörsställ. Ordna lösningarna av stärkelse, avjoniserat vatten och KI/jodlösning på arbetsbänken.
- Fyll rör 1 med 3 ml avjoniserat vatten; detta rör används som blank. Fyll därefter rör 2–6 med 3,0 ml, 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml respektive 2,1 ml avjoniserat vatten. Tillsätt stärkelselösning enligt följande: rör 2 får 0 ml, rör 3 får 0,1 ml, rör 4 får 0,3 ml, rör 5 får 0,6 ml och rör 6 får 0,9 ml.
- Tillsätt en droppe KI/jodlösning till vart och ett av de sex rören. Blanda varje rör noggrant innan du registrerar dess absorbans i spektrofotometern.
- Fyll kyvetten med blanklösningen, torka utsidan ren och placera kyvetten i referenshållaren. Justera absorbansen till noll. Alla övriga lösningar ger då en positiv absorbans.
- Fyll mätkyvetten med var och en av de övriga fem lösningarna i tur och ordning. Torka utsidan av kyvetten före varje mätning och registrera absorbansvärdet för varje rör. Skölj kyvetten med den nya lösningen minst en gång innan den fylls för mätning.
- Rita en graf där absorbansvärdena plottas mot stärkelsekoncentrationen. Detta är standardkurvan som gör det möjligt att bestämma koncentrationen hos en lösning utifrån ett givet absorbansvärde.
Del 2: Bestäm amylaskoncentrationen
- Rengör alla provrör från första delen av testet. Behåll röret med blanklösningen, det behövs senare.
- Ta ett blodprov från patienten. Placera provet i en centrifug och separera de röda blodkropparna från blodplasman.
- Fyll ett provrör med 9 ml avjoniserat vatten och 1 ml blodplasma. Detta ger en utspädning av plasman på 1:10. Blanda röret noggrant och pipettera över 1 ml av lösningen till ett andra provrör. Märk båda rören tydligt med sitt innehåll.
- Förbered det tidsbestämda testet. Ha ett stoppur till hands och ställ upp sju provrör med tillhörande kyvetter i provrörsstället. Avläsningar tas varannan minut under testets gång. Registrera exakt tidpunkt och absorbansvärde för samtliga sju datapunkter. Fyll vart och ett av de sju provrören med 2 ml avjoniserat vatten.
- Tillsätt 9 ml stärkelselösning till provröret som innehåller 1 ml av den utspädda plasman. Starta stoppuret i samma ögonblick som du börjar tillsätta stärkelselösningen. Blanda provröret väl och pipettera 1 ml av stärkelse-plasmalösningen till det första av de sju provrören. Registrera tiden, tillsätt en droppe KI/jodlösning och blanda.
- Överför lösningen till kyvetten, torka utsidan och registrera absorbansen. Upprepa proceduren med de återstående sex provrören med två minuters mellanrum. När testet är avslutat ska du ha mätvärden för tidpunkterna 0, 2, 4, 6, 8, 10 och 12 minuter.
- Använd standardkurvan för att ta fram stärkelsekoncentrationen vid vart och ett av de sju datapunkterna. Värdena minskar med tiden eftersom amylasen bryter ner stärkelsen och successivt förbrukar allt som finns tillgängligt.
- Rita datapunkterna från det tidsbestämda testet i en graf med stärkelsekoncentration mot tid. Kurvans lutning anger mängden amylas i plasmaprovet.
Tolkning av resultat: Förhöjda amylasnivåer i blodet kan tyda på akut pankreatit eller andra sjukdomstillstånd i bukspottkörteln, medan låga värden kan ses vid exempelvis kronisk pankreatit eller leverskada. Resultaten bör alltid bedömas av läkare tillsammans med övriga kliniska fynd och patientens symtom.
