DAPI är en förkortning av det kemiska ämnet 4'-6-diamidino-2-fenylindol och används för att färga dubbelsträngat DNA. Ämnet bildar blå fluorescerande komplex med cellernas kärnor och används därför ofta inom mikroskopi för att framhäva cellers struktur. Dessutom kan färgningens intensitet och mönster hjälpa forskaren att identifiera döda eller döende celler.
Obs: DAPI betraktas som en potentiell mutagen och bör hanteras med skyddshandskar, labbrock och lämpliga säkerhetsrutiner. Förvaras lösningen mörkt och svalt bevaras dess fluorescerande egenskaper längre.
DAPI-lösningen måste först spädas ut till en arbetslösning innan den kan användas. Som exempel ska 10 mg av Invitrogens DAPI-produkt blandas med 2 ml avjoniserat vatten. Lösningen späds därefter ytterligare till en koncentration på 300 nanomolar (nM) med fosfatbuffrerad saltlösning (PBS). Exakta anvisningar för spädning finns alltid på produktens etikett eller i medföljande bruksanvisning.
Fixera provet på ett objektglas på det sätt som är lämpligt för just den provtyp som ska undersökas. Tillsätt därefter 300 mikroliter av DAPI-arbetslösningen ovanpå provet och låt det inkuberas i en till fem minuter. Skölj slutligen objektglaset försiktigt med PBS för att avlägsna överflödig färglösning.
Granska det objektglasmonterade provet i ett fluorescensmikroskop. De DAPI-färgade cellkärnorna känns enkelt igen tack vare sitt karakteristiska blå fluorescerande ljus, vilket gör det möjligt att studera cellkärnornas form, antal och fördelning i provet.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online