Hur blockeringsbuffertar fungerar i immunkemiska analyser

Blockeringsbuffertar används för att stabilisera belagda proteiner i immunkemiska analyser. Enligt Immunochemistry Technologies minskar de störningar i resultaten av enskilda analyser, ökar analysens känslighet, förbättrar effektiviteten och hållbarheten hos belagda plattor samt främjar reproducerbarheten.

Blockeringsbuffertar hämmar icke-specifik bindning efter det att proteiner och antikroppar har bundits samman och absorberats på den belagda analysplattan under en ELISA (enzymkopplad immunosorbentanalys). Eftersom ELISA-analyser kan konstrueras på olika sätt finns det flera valmöjligheter för blockeringsbuffertar som möter en teknikers individuella krav.

Du behöver

• Antikroppsprov
• Proteinprov
• Analysplatta
• Blockeringsbuffert
• Laboratoriebägare
• Pipett

Instruktioner

Steg 1: Välj rätt blockeringsbuffert

Välj din blockeringsbuffert beroende på vilken typ av ELISA du ska utföra. Valmöjligheter inkluderar:

• Allmänna blockeringar (däggdjursproteinscaffold) för sandwich- och antigen-ned-ELISA
• BB2 Neptune blocking (icke-däggdjursproteinscaffold) för human- och däggdjurs-ELISA
• BB3 SynBlocks (små, syntetiska molekylära scaffolds) för högstyrkesblockerings-ELISA
• BB4 Phosph-Free (små, syntetiska, fosforfria molekylära scaffolds) för ELISA med hög icke-specifik enzymmärkt konjugatbindning

BB4-bufferten är särskilt användbar i analyser som använder alkaliskt fosfatas, kemiskt behandlade eller glasreaktionsplattor samt inom mikrofluidik, enligt Immunochemistry Technologies, ett företag som levererar all relevant analysutrustning.

Steg 2: Belägg analysplattan

Belägg analysplattan med ditt antigen (protein) eller antikroppen genom att hälla lösningen över plattorna.

Steg 3: Sug bort beläggningslösningen

Sug bort (aspirera) beläggningslösningen genom att luta plattan så att överskottet hälls ut i en separat behållare.

Steg 4: Tillsätt blockeringsbuffert

Pipettera 300 till 400 mikroliter av blockeringsbufferten i varje brunn på analysplattan med hjälp av en pipett.

Steg 5: Inkubera lösningarna

Inkubera lösningarna i ungefär tre timmar eller över natten vid omgivande temperaturer (4 grader Celsius). Enligt företaget Cell Technology bevarar rätt blockeringsbuffert dina reagens, vilket kan vara värdefullt eftersom de är kostsamma och kan vara i kort tillgång.

Steg 6: Tvätta bort överskott

Tvätta bort överskottet av protein, eftersom detta kan minska detekteringen av ditt målantigen, enligt Pierce Net.

Steg 7: Kontrollera resultatet

Vid denna tidpunkt är reaktionen komplett och du bör ha en färdig platta som innehåller rätt mängd antikropp bunden till antigen, vilket ger konsekventa resultat och minskar variation mellan plattor i stora jämförande analyser.

Steg 8: För mikroarrayer

I fallet med en mikroarray, använd en avancerad blockeringslösning som Array Its Block It Buffer, som har utformats specifikt för att inaktivera alla reaktiva grupper som återstår efter ett "utskrift" av substrat på objektglas som innehåller super-epoxi, super-amin och super-aldehyd, samtidigt som skärpan hos den resulterande signalen bibehålls, fluorescens förhindras och brusreduktion underlättas. Detta reagens har en hållbarhet på ett år om det lagras korrekt, är extremt rent och levereras som ett färdigt koncentrat.