Hemoglobinprover kan tas från en försöksperson eller patient och separeras därefter i sina beståndsdelar med hjälp av elektrofores i laboratoriemiljö. Innan hemoglobinet kan köras genom geler måste provet dock förberedas noggrant, så att separationen blir korrekt och tydlig under processen.
Detta protokoll utgår från att rätt geler och lämpliga elektroforestekniker väljs utifrån den analys som ska utföras. Nedan följer en stegvis beskrivning av hur ett hemoglobinprov förbereds för gelelektrofores.
Det du behöver
- Hemoglobinprov (från blod)
- Eppendorf-rör
- Laboratoriefrys med temperatur på −20 °C
- Komplett kit för gelelektrofores
Instruktioner
Förberedelse
- Överför provet. Överför helblodsprovet som ska användas för elektrofores till ett rent eppendorf-rör. Kontrollera att röret är ordentligt slutet för att undvika läckage och kontaminering.
- Frys provet. Frys provet i en frys som är avsedd för lagring av organiskt material, exempelvis blod, vid −20 °C. Låt det ligga kvar tills det är helt fruset – detta tar normalt några timmar, men kan behöva ske över natten. Frysningen spränger de röda blodkropparna och frigör därmed hemoglobinet (hemolys).
- Tina upp och separera. Tina upp provet utan att virvelmixa eller skaka det. Ta sedan till vara överståendet (supernatanten); detta är hemolysatet som ska användas för elektrofores.
- Tillsätt buffert. Tillsätt de buffertar som bäst passar den aktuella gelen och de elektroforesförhållanden som ska användas för att köra provet. Buffertens pH och jonstyrka är avgörande för en god separation.
- Kör elektroforesen. Ladda provet i gelen och kör experimentet enligt anvisningarna för den utrustning och geltyp som används.
