Flödescytometri: Principer, tillämpningar och dataanalys

Flödescytometri mäter samtidigt flera fysiska och fluorescenta parametrar på enskilda celler i suspension med högt genomflöde (10 000–50 000 händelser/sek).

Kärnprinciper

Hydrodynamisk fokusering: Provekärna centreras i höljefluid → en-fil-interrogation.
Ljusspredning: FSC (framåtspredning ≈ storlek), SSC (sidospredning ≈ granularitet/komplexitet).
Fluorescens: Fluorokromkonjugerade antikroppar binder målantigener; lasrar exciterar; detektorer fångar emission (bandpassfilter).
Kompenstation: Spektral överlappkorrektion mellan fluorokromer.
Gating: Sekventiella plotter isolerar populationer av intresse (t.ex. lymfocyter → singlets → CD3+ → CD4/CD8).

Viktiga tillämpningar

Fält	Användning
Immunofenotypning	Lymfocytundergrupper (T/B/NK), aktiveringsmarkörer, Tregs, utmattning (PD-1, TIM-3)
Hematologiska maligniteter	Leukemi/lymfom diagnostik (CD-markörer), MRD (10⁻⁴–10⁻⁶), linjetilldelning
Cellcykel / Proliferation	Ki-67, DAPI/PI, BrdU/EdU — S/G2/M andel
Apoptos	Annexin V / 7-AAD eller PI — tidig/sen apoptos
Funktionell	Cytokinfångst (ICS), fosfo-flöde (pSTAT, pERK), calciumflöde, ROS, mitokondriellt potential
Cellsortering (FACS)	Högreinhållande isolering för genomik, odling, transplantation

Moderna framsteg

Spektral cytometri (40+ parametrar, autofluorescens unmixing)
Masscytometri (CyTOF) — metallerade antikroppar, 40+ parametrar, inget spektralt överlapp
Avbildande flödescytometri (morfologi + fluorescens)
Single-cell multiomics (CITE-seq, REAP-seq: ytproteiner + transkriptom)

Kvalitetskontroll

Dagliga QC-pärlor (justering, känslighet, fluorescensstabilitet)
Standardisering: EuroFlow, ICCS, CYTOF-paneler.
Biosäkerhet: BSL-2 för ofixerade mänskliga prover; fixering för transport.

Hjärnkirurgi