Molisch-provet: Princip, procedur och tolkning för kolhydratdetektering

Molisch-provet är ett känsligt, generellt kvalitativt prov för kolhydrater (mono-, di-, polisackarider, glykoproteiner).

Kemisk princip

1. Dehydrering: Konc. H₂SO₄ avlägsnar H₂O från kolhydrat → furfural (pentoser) eller 5-hydroximetylfurfural (hexoser).
2. Kondensation: Furfualderivater reagerar med α-naftol (1% i etanol) → lila/violett cyklic produkt (Molischs kromogen) vid vätskegränsen.

Procedur

1. 2 mL provlösning (eller suspension) i ett rent provrör.
2. Tillsätt 2–3 droppar α-naftollösning; blanda lätt.
3. Luta rör; häll lätt 1–2 mL konc. H₂SO₄ ner längs kanten för att bilda ett distinkt undre lager. Blanda inte.
4. Observera gränsen omedelbart.

Tolkning

• Positivt: Lila/violett ring vid gränsen inom sekunder. Intensitet ∝ kolhydratkoncentration.
• Negativt: Ingen färgförändring (eller bara gul/brun från köldning).

Känslighet och begränsningar

• Detekterar ~1–5 µg kolhydrat.
• Falska positiva: Vissa icke-kolhydrater (glycerol, mjölksyra, vissa aminosyror) ger svag färg.
• Skiljer inte kolhydrattyp; följ med specifika prover (Benedict's, Barfoed's, Seliwanoff's, Bial's, jod).
• Konc. H₂SO₄ risk: ätande, exoterm; använd skyddsutrustning, häll syra i rör (inte vatten i syra).

Tillämpningar

Screening för kolhydrater i okända prover, livsmedelsanalys, biokemiska fraktioner, växtextrakt.