pcDNA3.1 plasmiddfamiljen (Invitrogen/Thermo Fisher) är en mycket använd mammalisk expressionsvektor. Nyckelelement inkluderar:
Kärndrag
- CMV-promotor: Stark konstitutiv promotor för hög nivå expression i mammaliska celler (inte T7 — T7 är för in vitro transkription).
- Multipla kloningsplats (MCS): Omgiven av restriktionssajter för riktad kloning.
- BGH polyadenyleringssignal: Boskap tillväxthormon polyA för mRNA-stabilitet och kärnexport.
- SV40 ursprung: För episomal replikation i celler som uttrycker SV40 stor T-antigen (t.ex. HEK293T).
- f1 ursprung: Enkelsträngad DNA-produktion för sekvensering/mutagenes.
- Neomycin/kanamycin resistens (NeoR/KanR): G418-selektion i mammaliska celler; kanamycin för bakteriell selektion.
- Ampicillin resistens (AmpR): Bakteriell selektion (β-laktamase).
- ColE1 ursprung: Högkopia replikation i E. coli.
- T7-promotor: Upstream av MCS för in vitro transkription (IVT) applikationer.
Versionsskillnader
- pcDNA3.1(+): CMV → MCS → BGH polyA i framåtriktad orientering.
- pcDNA3.1(-): Omvänd orientering (användbart för vissa kloningstrategier).
- pcDNA3.1/V5-His, /myc-His, /HA: Inkluderar epitopptaggar och His6 för detektering/rening.
- pcDNA3.1/CT-GFP, /NT-GFP: GFP-fusionsvarianter.
Applikationer
Transient/stabil transfections, stabil celllinjegenerering, proteinexpression, funktionsstudier, antikroppsproduktion. Hög kopietal i E. coli underlättar plasmiddpreparation.
Notera: Originalbeskrivningen felaktigt listade T7 som mammalisk promotor. CMV är den mammaliska promotorn; T7 är för IVT.
