Metoder för att mäta NADPH - oxidas

Enzymet NADPH-oxidas identifieras som en producent av reaktiva syreradikaler under processer , inklusive tillväxt av glatta muskelceller . Dessa reaktiva species är kopplade till en rad olika sjukdomar, inklusive högt blodtryck, diabetes , cancer och inflammation; metoder för övervakning av aktiviteten hos detta enzym är kritisk för möjlig behandling utveckling. NADPH-oxidas

NADPH-oxidas tillhör en familj av enzymer som hjälper till med elektronöverföring mellan NADPH och syre. Dock har NADPH-oxidas en unik förmåga att producera reaktiva syreradikaler från denna reaktion , jämfört med andra familjemedlemmar där reaktiva syreradikaler genereras på andra sätt . Ett multimert proteinkomplex , NADPH-oxidas består av den membranbundna flavocytochrome b558 , som används som ett mått markör. Addera reaktiva syreradikaler (ROS) Generation

den främsta källan till ROS , särskilt väteperoxid , producerar NADPH-oxidas små men konsekventa mängder via sin isoform uttryckt i blodkärlen , som är involverade i signalprocesser. Denna konsekventa produktion kan så småningom överväldiga naturlig antioxidant systemet , vilket orsakar en förlust av skyddande ämnen såsom kväveoxid , och uppkomsten av ännu mer kraftfull ROS .
Chemiluminescence Metod

Chemiluminescence möjliggör mycket känslig , automatiserad mätning av NADPH-oxidas aktivitet över ett område av koncentrationer . Under denna metod , är NADPH substrat till ett vävnadsprov som innehåller NADPH-oxidas . Vid reaktionen ROS genereras och reagerar med föreningen lucigenin att producera en chemilluminescent effekt , som mäts . Luminescens är direkt proportionell mot NADPH-oxidasaktivitet , som enzym bestämmer reaktionshastigheten . Addera Kinetic Assay via flödescytometri

I denna metod är vävnadsprover analyseras via flödescytometri. Benmärg är separerad från provet med användning av Hanks balanserade saltlösning . Specifika fläckar och upptäcka antikroppar till provet i polystyren rör. Provet inkuberas därefter , tvättades med Hanks balanserade saltlösning , märkt med molekylära prober och framställd från flödescytometri. Kontrollrör görs även för jämförelse och för att kalibrera flödescytometer. Maskinen är sedan sprang och mätningar registreras . Addera