MBP- reningsprotokoll

MBP eller maltosbindande protein hittas i bakterier Escherichia coli, som är en del av tarmfloran hos människor och djur. Reningen av MBP involverar en rad förfaranden som syftar till att separera proteinets beståndsdelar . I molekylärbiologi , är MBP rening en viktig process för att studera struktur och funktion av detta protein . MBP reningsprotokollinkluderar MBP smälta proteiner rening , småskalig MBP - fusion och maltos bindande protein fusion tag rening . MBP- fuserade proteiner Rening

Under detta protokoll , tekniker tvätta 20 ml av polymer amylosharts med atris lösning vid pH 7,4 , natriumklorid, merkaptoetanol (ME) och etylendiamintetraättiksyra (EDTA ) , i enlighet med protokollen Online . Cellprover tillsättes , centrifugerades och analyserades med gelelektrofores. Proverna analyseras också i ett chromatographer , där tekniker eluat eller observera lösningens väljare medan det passerar genom kromatografi .
Småskalig MBP - fusions Protein Purification

Enligt hebreiska universitetet i Jerusalem , biologer använder reagens isopropyl BD- 1 - tiogalaktopyranosid ( IPTG ) , spinn cellodling under 10 min vid 8000 varv per minut vid 39,2 grader Fahrenheit . Senare , de tar bort överstående vätskan och blanda kall PBS-buffert till provet , som är uppdelad i flera rör och centrifugeras på nytt . Proven hölls sedan vid -112 grader Fahrenheit för bakre analys . Addera maltosbindningsprotein Fusion Tag Purification

Affinity taggar är genetiskt manipulerade molekyler som används i molekylärbiologi för att detektera och rena proteiner . Detta protokoll är en komplex uppsättning förfaranden uppdelad i tre etapper , som omfattar byggandet av polyhistidin proteinmarkör( HisMBP ); ett pilotexperimentför att utvärdera lösligheten av proteinet; och storskalig rening av MBP molekyler , enligt Nature protokoll . Bortsett från E. coli- prover , tekniker använda ampicillin , kanamycin , IPTG , anhydrotetracyklin , glukosmonohydrat , cellysbuffert , DNA-polymeras , PCR- primers , Tris - acetat - EDTA och etidiumbromid . Addera