Agar är en gelatinliknande substans som utvinns från rödalger och används till många olika ändamål. Ett av dess vanligaste användningsområden är som odlingsmedium för bakterier. LB-agar är näringsagar som har kombinerats med lysogeny broth (LB). Det är en utbredd missuppfattning att LB står för Luria-Bertani. Uppfinnaren Giuseppe Bertani förklarar dock i sin artikel "Lysogeny at Mid-Twentieth Century: P1, P2, and Other Experimental Systems" att förkortningen alltid var avsedd att betyda lysogeny broth – alltså inte hans eget namn och namnet på hans forskarkollega Salvador Luria. LB-agar är mångsidigt och förvånansvärt enkelt att tillverka själv.
För 1 liter färdigt medium:
Lägg tryptonen, jästextraktet och saltet i Erlenmeyerkolven. Använd en kolv som rymmer minst dubbelt så mycket som den volym medium du planerar att tillverka.
Tillsätt det destillerade eller avjoniserade vattnet och rör om eller skaka tills de flesta torra ingredienserna har löst sig.
Tillsätt agarn och fortsätt att röra eller skaka. All agar löser sig inte, men det är viktigt att större delen kommer i lösning. Undvik stora klumpar av olöst agar som sjunker till bottnen av kolven.
Stäng kolvens öppning med aluminiumfolie.
Ställ kolven i ett autoklavtåligt kärl.
Häll i cirka 1 cm vatten i kärlet.
Ställ kärlet och kolven i autoklaven. Ställ in autoklaven på ett program för vätskor och sterilisera i minst 20 minuter. Använder du en tryckkokare går du vidare till steg 8, annars hoppar du till steg 10.
Använder du tryckkokare, häll en liten mängd vatten i kokaren och placera kolven i vattnet. Försök aldrig sterilisera mer än 250 ml åt gången med denna metod.
Höj trycket i tryckkokaren till cirka 20 psi (motsvarande ungefär 1,4 bar) och sterilisera i cirka 30 minuter.
Ta ut kolven ur autoklaven eller tryckkokaren. Var försiktig – kolven är mycket het.
Virvla försiktigt runt innehållet i kolven när steriliseringen är klar. Det fördelar agarn jämnare i lösningen.
Ställ kolven på lämplig yta och låt den svalna något. Har du berett 1 liter eller mer bör du virvla runt innehållet varsamt var 10–20:e minut. Du vet att mediet har svalnat tillräckligt när du kan hålla ovansidan av fingrarna mot kolven i ungefär 2 sekunder utan att det känns obehagligt hett. Vänta cirka 15–20 minuter innan du testar detta.
Placera en petriskål på ett plant underlag. Lyft locket försiktigt i vinkel så att större delen av skålen fortfarande är täckt. Lyft inte av locket helt från skålen.
Häll mediet från kolven i petriskålen tills skålen är ungefär halvfull.
Sätt genast tillbaka locket, flytta skålen åt sidan och fortsätt med nästa tills alla önskade plattor är fyllda. Plattorna stelnar helt på cirka 30 minuter.
Ska du inte odla plattorna direkt, lägg dem i den sterila påse de levererades i eller i annat lämpligt sterilt förvaringskärl. Förslut behållaren för att bevara fukten och märk gärna upp plattorna. Vid förvaring bör plattorna hållas vid en temperatur på cirka 39–40 °F (ungefär 4 °C).
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online