NBT Assay Protocols

NBT eller nitro blå tetrazolium är en kemisk förening som används i biokemi och immunologi för detektering av enzymet alkaliskt fosfatas. Substansen används också i diagnosen test av kronisk granulomatös sjukdom , som drabbar de immunodefense celler. NBT analysprotokoll inkluderar immunoblotting , BCIP /NBT alkaliska fosfatassubstratlösningen och upptäckt av galaktosidas och alkaliskt fosfatas verksamhet i vävnad . Immunblot

Immunoblotting är en teknik som används för att detektera antikroppar , som är proteiner som är involverade i immunodefense processen , säger Susan R. Haynes i " RNA -proteininteraktion Protocols . " Detta innefattar användning av NBT , såväl som bovint serumalbumin, primära antikroppar 9E10 , Comassie färgningslösning , nitrocellulosamembran , Tris-bas -buffertlösning , ammonium- per - sulfat, natriumdodecylsulfat och vattenmättad butanol .

BCIP /NBT- alkaliskt fosfatas-substratlösning

tekniker framställa en lösning med tre droppar av en procent 5 -brom- 4 -klor- 3 -indolyl -fosfat ( BCIP ) , tre droppar av 1,5 procent NBT , två droppar av den kemiska substansen levamisol och alkaliskt fosfatas ( AP) buffert vid pH 9,5 , enligt den IHC World webbplats. Lösningen inkuberas sedan vid rumstemperatur och tillgängliga att använda . Addera Upptäckt av galaktosidas och alkalisk fosfatas verksamhet i Tissue

galaktosidaser är enzymer som kan bryta galaktosid molekyl , närvarande i bakterien Escherichia coli och andra organismer. Enligt protokoll Online , under detta protokoll , biologer använder cellprover råtta som behandlats med PBS -lösning , glutaraldehyd och paraformaldyde . Därefter förbereda de brom -klor -indolyl -galaktopyranosid eller X-gal -reaktionsbuffert för prover , med användning av kaliumferrocyanid, magnesiumklorid, natriumdeoxikolat och detergenten Nonidet P- 40 . Tekniker kan använda nitro blue tetrazolium (NBT ) i stället för kaliumferrocyanid som en snabbare alternativ . Cellproversenare observeras under mikroskop . Addera