Western blotting Protokoll

A Western blottar är en typ av protein blot som används inom det medicinska området , biologi labb och andra vetenskapliga discipliner på en daglig basis . Western blöts , när den utförs på rätt sätt, är ett sätt att studera proteinuttryck i vävnadsprover. Eftersom det kan finnas skillnader i parametrarna för varje prov , det finns ett antal protokoll som bör följas för att få korrekta resultat . Performing Tvättar

Efter inkubering av membranen i de antikroppslösningar för lämplig tid , som varierar beroende på vilket antikroppslösning används, sägs Encor Biotechnology att membranet bör genomgå tre rumstemperatur tvättar i TBS. TBS är en lösning som har en specifik makeup och pH för tvätt . Membranet ska tvättas mellan varje införandet av en ny antikropp lösning .
Förbereda Färgnings Blandning

Enligt WesternBlotting.org , förbereda färgning blandningen omedelbart före ansökan det att medlemmen kommer att uppnå bästa resultat . Det finns flera typer av färglösningar , av vilka några kan köpas och av vilka en del måste blandas i labbet. Kemiluminescens färgning , enligt Encor Bioteknik , ger mest information per fläck , men är också den dyraste och kräver ett mörkrum för framkallning . Pepparrotsperoxidas färgning och alkaliskt fosfatas blotting finns andra alternativ för färgning . Oavsett vilken metod som används , beredning av blandningen strax före användning är nödvändig . Addera Med hjälp av en buffert

Efter att den valda färgningslösningen och användning av en buffert är nyckeln. I kemiluminescens färgning , applicera ett acetat över toppen av färglösningen är protokoll , enligt WesternBlotting.org . Pepparrotsperoxidas Färgnings kräver användning av en ammoniumacetatbuffert för att erhålla den bruna färgn produkten. Bufferten används i alkaliskt fosfatas blotting , som ska skapa en lila färgning produkt , är mer komplicerat att göra och kan köpas redan gjort . Addera