Agarplattor är ett grundläggande verktyg inom molekylärbiologi och bakteriologi och används för att odla mikroorganismer som bakterier i experimentsyfte. Agar är det ämne som stelnar, eller gelatiniserar, ett flytande näringsmedium som mikroorganismen behöver för att överleva och växa. När bakterierna har överförts till en agarplatta växer de till tydliga kolonier (vid låga koncentrationer) eller till sammanhängande beläggningar (vid höga koncentrationer) och kan sedan skördas för analys.
Att framställa agarplattor kräver tillgång till laboratoriekvalitativa reagenser och utrustning samt goda kunskaper inom molekylärbiologi och sterila arbetstekniker. Nedan följer en noggrann genomgång av hela processen.
På dig lämplig skyddsutrustning, inklusive handskar, labbrock och ansiktsmask, och dekontaminera alla ytor. Arbeta bredvid en Bunsenbrännare eller, ännu bättre, i en steril laminar flow-bänk. Detta hindrar luftburna föroreningar från att falla ner i agarn.
Ta ut stapeln med petriskålar ur förpackningen men spara den så att du kan förpacka de färdiga agarplattorna igen. Märk utsidan av skålen (inte locket) med typen av agar och datumet för beredningen. Lägg upp plattorna i ett enda lager utan lock så att det blir lättare att hälla i agarn.
Blanda bacto-trypton, jästextrakt och agaros tillsammans och tillsätt därefter natriumhydroxidlösningen (NaOH). Tillsätt sterilt destillerat vatten tills du får 1 liter näringsmedium. Häll över lösningen i en glasflaska med minst 1,5 liters volym. Skruva på locket löst och märk flaskan med beredningsdatum och mediets namn. Sätt en remsa autoklavtejp på flaskan och autoklavera den i 25 minuter.
Låt flaskan svalna till mellan 45 och 50 grader Celsius – blir den kallare stelnar agarn i förtid. Flaskor med avsvalnad och stelnad agar kan förvaras vid 4 grader Celsius och värmas upp igen tills agarn smälter. Om ditt experiment eller din bakteriestam kräver det, tillsätt nu rätt typ och mängd tillskott, exempelvis antibiotika. Observera att tillskotten förstörs om mediet är för hett, så kontrollera alltid temperaturen noga innan du fortsätter.
Häll en tillräcklig mängd agar för att fylla skålen till hälften medan agarn fortfarande är varm och flytande. Se till att hela ytan täcks helt. Häll inte i för mycket och låt inte agarn nå upp till kanten på skålen. Håll plattorna i en steril miljö genom att låta Bunsenbrännaren eller laminar flow-bänken arbeta kontinuerligt. Låt plattorna stelna och sätt sedan på locken.
Torka agarplattorna i cirka 30 minuter till en timme i ugn inställd på högst 37 grader Celsius. Alternativt kan du låta dem stå i laminar flow-bänken i tre minuter, eller på en dekontaminerad laboratoriebänk i ett lugnt område utan drag i en till två dagar. Torkningen gör att en bakterielösning som appliceras på agarytan inte bara späds ut och rinner av, utan istället bildar kolonier som fastnar på agarn.
Förvara plattorna varsamt mörkt och vid 4 grader Celsius. Stapla de torkade agarplattorna med bottnarna uppåt så att du tydligt kan se etiketterna och så att mikroorganismer och skräp inte faller ner på agarytan och kontaminerar dem. Lägg tillbaka skålarna i deras originalförpackning, täck med aluminiumfolie och tejpa igen förpackningen. Märk de packade plattorna med innehåll och beredningsdatum. Plattorna kan förvaras i upp till två månader och bör kasseras efter dess.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online