Kemiska ämnen och blandningar har specifika egenskaper när det gäller förmågan att absorbera ljus vid bestämda våglängder. Absorbansmätningar är ovärderliga inom både kemi och molekylärbiologi för att identifiera och kvantifiera komponenter i en blandning. Koncentrationen av DNA bestäms exempelvis genom att mäta ljusabsorbansen vid den ultravioletta våglängden 260 nm.
Motsatsen till absorbans är transmittans – alltså hur mycket ljus som passerar genom ett ämne. Beers lag beskriver det matematiska sambandet mellan transmittans och absorbans, och med hjälp av denna lag kan du enkelt beräkna absorbansen utifrån dina transmittansdata.
Mät transmittansen hos det ämne som ska testas med hjälp av en spektrometer. Värdet visas direkt på instrumentets display. Transmittans definieras som förhållandet mellan det transmitterade ljuset (I) och den ursprungliga ljusintensiteten (I0), alltså T = I/I0. Om displayen exempelvis visar 50 % motsvarar detta en transmittans på 0,5.
Beräkna sedan det inversa värdet av transmittansen, det vill säga 1/T, vilket motsvarar I0/I. Med miniräknaren får du det inversa värdet genom att dividera ett med transmittansen. Exemplet från steg 1 ger då 1/0,5 = 2.
Beräkna absorbansvärdet från transmittansens inversa värde med hjälp av logaritmfunktionen (LOG). Beers lag beskriver sambandet mellan absorbans (A) och transmittans (I/I0) med formeln A = log(I0/I), där I0/I är lika med 1/T. Ange värdet för 1/T i miniräknaren och tryck på LOG-knappen. Exemplet ger då A = log 2 ≈ 0,3 absorbansenheter.
Kom ihåg att absorbansen enligt Beer–Lamberts lag (A = ε · l · c) är proportionell mot provets koncentration, där ε är den molära absorptiviteten, l är provets väglängd och c är koncentrationen. Detta gör absorbansmätningar till ett kraftfullt verktyg för exakt koncentrationsbestämning i laboratoriemiljö.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online