XTT-protokoll – en komplett guide till analys av cellviabilitet

XTT-analysen för cellviabilitet erbjuder en säker och enkel metod för att bestämma mängden levande celler genom att mäta hur cellerna svarar på externa faktorer i mikrotiterplattor. XTT-protokollet är att föredra framför MTT-metoden, eftersom det eliminerar användningen av tymidin, ett radioaktivt ämne, och samtidigt levererar pålitliga resultat som är lätta att reproduceras.

Kemisk reaktion

XTT-protokollet använder tetrazoliumsalter för att analysera cellproliferation, cellviabilitet och cytotoxicitet. Metoden möjliggör snabb bestämning av cellstatus direkt i mikrotiterplattor. Den kemiska grundprincipen bygger på klyvning av tetrazolium till formazan, vilket sker genom tetrazoliumreduktassystemet i mitokondrierna hos metaboliskt aktiva celler. Ju fler aktiva celler som finns i provet, desto mer formazan bildas, vilket kan kvantifieras spektrofotometriskt.

Komponenter i XTT-protokollet

Genomförandet av XTT-protokollet kräver tre testkomponenter: XTT-reagenset, XTT-aktiveraren och XTT-arbetslösningen.

XTT-reagens

XTT-reagenset ska förvaras vid temperaturer under 20 °C. Under lagring kan utfällning bildas i reagenset, och det måste därför värmas upp till 37 °C före användning för att uppnå fullständig återupplösning.

XTT-aktiverare

XTT-aktiveraren ska också förvaras vid temperaturer under 20 °C och värmas till 37 °C tills den är helt upplöst innan den tas i bruk.

XTT-arbetslösning

Före testet bereds arbetslösningen genom att kombinera 5 ml XTT-reagens med 100 µl XTT-aktiverare. Lösningen bör användas omgående efter beredning för att säkerställa optimala och repeterbara resultat.

Fördelar med XTT-protokollet

Det finns flera fördelar med att använda XTT-protokollet i stället för radioaktiv märkning av cellernas DNA med tymidin:

• Högre känslighet: Metoden ger mer exakta och tillförlitliga mätvärden än traditionella tekniker.
• Inga radioaktiva ämnen: Användningen av radioaktivt material elimineras helt, vilket förbättrar arbetssäkerheten och förenklar avfallshanteringen.
• Snabb genomförande: Analysen kan utföras snabbt utan steg för cellstabilisering.
• Lämplig för hög kapacitet: Protokollet rekommenderas för high-throughput-analyser och minskar både cellförlust och variation mellan resultaten.

Sammantaget gör dessa egenskaper XTT-protokollet till ett effektivt och säkert alternativ för laboratorier som regelbundet behöver utvärdera cellviabilitet, proliferation och cytotoxicitet.