N terminal sekvense Protocol

Edman-nedbrytning - en välkänd process för identifiering av den N- terminala aminosyran i ett protein - kräver klyvning av aminosyran , följt av identifiering med användning av kromatografi eller elektrofores. Automatiserade processer påskynda N - terminal sekvensering . Fakta

Proteiner produceras inom enskilda celler fungerar som hormoner , enzymer och andra viktiga regulatorer . Genetisk mutation som resulterar i ett onormalt protein kan få allvarliga konsekvenser för hälsan.
Process

N - terminala aminosyran klyvs av behandling med en av flera reagenser , sedan hydrolyseras för att bilda en separat aminosyra. Tunnskiktskromatografi , HPLC eller elektrofores bestämmer storleken av aminosyran , och jämför den med en känd storlek standard . Den nya N-terminala änden av det kvarvarande proteinet kan likaledes spjälkas för identifiering.

Automation

Applied Biosystems ledde utvecklingen av automatisering av Edman-nedbrytning , vilket binder ett renat protein till ett membran och behandlar den med fenylisotiocyanat . Den fria aminosyran ter injiceras automatiskt in i ett HPLC-system för identifiering. Köpa och sälja Komplikationer

Proteiner måste stanna relativt ren och fri från föroreningar för att noggrant bestämma den N -terminala aminosyran . Edman nedbrytnings gränser kräver stora proteinmolekyler uppdelad i små peptidkedjor inte längre 50 aminosyror . Addera