Hur man mäter Protein Expression

Protein uttryck åtgärd kan ge ledtrådar om verksamheten i de gener i kroppen , eftersom proteiner fungerar som den slutliga katalysatorn av cellaktiviteter. Men enligt en artikel i mars 2010 frågan om " LabMedicine ", patologer och biologer är ännu inte överens om bright mikroskopi eller fluorescensmikroskopi som den lämpligaste metoden för att mäta proteinuttryck . Hel - slide bright skanning är inte bara lätt att använda och ger kromogen stabilitet , men det kan skydda glas längre . Detta är vad du behöver
cellvävnad
Slide
Biotinylerad sekundär antikropp
Streptavidin - pepparrotsperoxidas
3,3 ' - Diaminobenzidine
Color line - scan kamera
Visa fler instruktioner
en

Placera cellvävnaden på ett objektglas och tillsätt en biotinylerad sekundär antikropp , följt av ett streptavidin- pepparrotsperoxidas och vänta på två minuter.
2

Häll fyra droppar av 3,3 ' - diaminobensidin på provet och vänta i två minuter för den bruna fläcken att helt spridas på provet . Addera 3

Placera en histologisk sektion av färgade prov på en motordriven plattform i ett väl upplyst rum . Justera noggrant Color Line - scan kamera till 20X eller 40X förstoring och skanna provet . Rikta in ränder i bilden och komprimera den digitala bilden till en läsbar filstorlek .
4

Skriv ut den digitala bilden för manuell analys eller mata in bilden i programvara för teknikstöddanalys . Följ mönstret av fläckar som presenteras i bilden . Noggrant analysera proteinexpression baserat på de mönster av fläckar på provet.
5

Utvärdera proteinuttryck på cancerceller och stroma genom att undersöka koncentrationen av protein som uttrycks på cellvävnad .

6

Använd färgmönster för att kvantifiera proteinuttryck i en skala från 0 till 3 + . Använd poäng för att beräkna HER - poäng eller Allred poäng. Addera