Perfusion Teknik

Perfusionen tekniken ger snabb och jämn fixering till alla enskilda celler som finns i vävnaden . En 4 procent paraformaldehyd fixativ förs via kärlsystemet för att erhålla vävnad av intresse . Huvud målställe för läkemedelsadministrering i ett speciellt organ kan identifieras med hjälp av denna teknik. Perfusion har också hjälpt forskare att förstå den strukturella och funktionella organisation av den mänskliga hjärnan . Detta är vad du behöver
djur ( råtta eller apa ) katalog Perfusion pump , bägare
Fixative ( 4 procent paraformaldehyd )
Kanyler
Perfusion droppa som
Saxar
Skalpell
Tång
0,9 procent saltlösning
Ice box
Visa fler Instruktioner
1

Bered en färsk 4 procent paraformaldehyd genom att blanda 40 g paraformaldehyd i 800 ml vatten . Värm upp lösningen till 60 C under omröring . Kyl lösningen till 4 C. Justera pH till 9,5 med hjälp av en pH-mätare . För justering av pH , till isättika för att erhålla det önskade pH
2

Ställ in perfusion pump, . Bifoga alla glasdelar och en perfusion nål . Springa 100 ml kranvatten genom slangen för perfusion pumpen för att ta bort eventuella rester från glasdelar . Placera en bägare av fixativ i en isbox . Addera 3

Öppna slutet av perfusion röret och placera den i ett fixativ bägare . Scale volymen av lösningen i enlighet med storleken på djuret . Justera nu perfusion pumpventilentill en långsam , stadig dropp . Stäng ventilen . Fyll perfusion apparaten med 0,9 procent ( vikt /volym ) saltlösning .
4

Ställ in operationsinstrument nära operationsbordet . Ge en anestesi injektion till djuret enligt dess kroppsvikt ( ketamin 0,5 mg /kg) . Placera djuret på operationsbordet med ryggen nedåt.
5

Gör ett snitt med en skalpell , utmed längden av membranet. Med de stora saxar , trubbig nedåt , skär den bindväv vid botten av membranet. Exponera hjärtat . Håll bultande hjärta med pincett och sätt en nål i vänster kammare .
6

Öppna ventilen för perfusion pumpen för att tillåta flödet av 0,9 procent saltlösning . Kontrollera att lösningen flödar fritt och djuret lever. Hjärtat av djuret bör kontinuerligt slå . När blodet ersätts med saltlösning , ändrar löser 4 procent paraformaldehyd.
7

Stoppa perfusion och dissekera en vävnad av intresse. Håll vävnad i samma medium vid 4 C. Addera