CellfrysProtocol

Bevara celler genom frysning är viktigt för forskning , veterinärmedicin och husdjursaveleftersom det tillåter celler som skall lagras under lång tid . Den frysmetodväljs måste emellertid minska eller förhindra skador på cellen . Den kryokonservering medlet och metod kan bero på celltypen . Förberedelser

Celler bör frysas när de är friska och i aktiv tillväxt med en 90 procent livskraft . Försiktighet bör iakttas om hantering och höghastighetscentrifugeringoch kraftig pipettering eller sugning bör undvikas för att bibehålla lönsamheten och förebygga cellskador . Addera kryoskydd

kryoskydd agent är användas som en ersättning för intracellulär vatten. Agenten hindrar iskristaller och uttorkning som sker i cellerna . Steriliserad glycerol och steriliseras dimetylsulfoxid används ofta vid en koncentration på 5 procent till 15 procent ( volym per volym ) utspätt i antingen fetalt kalvserum eller tillväxtmedier, beroende på celltyp . Addera Frys och lagring

Celler i frysblandningenbör kylas långsamt . Om en programmerbar frys inte är tillgänglig , kan cryovials slås in i silkespapper eller placeras i frigolit , vilket kan bromsa frysprocessen. Cellerna bör hållas vid minus 80 ° C under 24 timmar och överfördes sedan till flytande kväve för långtidslagring .

Avfrostning

Frusna celler skall upptinas snabbt. Ett vattenbad vid 37 ° C kan användas. Försiktighet bör iakttas med celler som är lagrade i flytande kväve , emellertid, såsom flytande kväve kan komma in i injektionsflaskor och kan explodera vid upptiningen . Frysblandningen bör spädas i tillväxtmediet. Cellviabilitet bör bedömas med färgämnet trypanblått och cellerna odlas som vanligt . Addera