CFU-protokoll: Metoder för att räkna viabla celler inom bioteknisk forskning

Kolonibildande enhet (colony-forming unit, CFU) är ett mått på antalet mikroorganismer. Till skillnad från andra metoder, som direkt mikroskopering där både döda och levande mikroorganismer beaktas, gör CFU-protokoll det möjligt för biologer att endast räkna viabla, det vill säga livskraftiga, celler. Standardmåttenheterna är kolonibildande enheter per milliliter (CFU/ml) för vätskor och kolonibildande enheter per gram (CFU/g) för fasta material. CFU-protokoll används i stor utsträckning inom bioteknisk forskning och mikrobiologiska laboratorier.

CFU-MK-analys vid akut trombocytopeni

Megakaryocyt (MK) är en typ av benmärgscell som bildar blodplättar. Detta protokoll används i studier av trombocytopeni, ett tillstånd som kännetecknas av ett onormalt lågt antal blodplättar.

Innan räkningen utfördes beredde laboratorieteknikerna CFU-MK-analysen med hjälp av följande material: humana navelsträngsblodsceller, Iscoves modifierade Dulbeccos medium, bovin kollagenlösning, serumfritt medium med proteiner som kallas cytokiner samt antikroppar mot TNP, anti-GPIIb/IIIa och anti-mus-IgG. Dessutom användes Evans blå motfärgning, Tris/NaCl-buffert och bovint serumalbumin.

Kolonianalysblandningsprotokoll

Tekniker bereder denna analys med humanplasma, den kemiska föreningen 2-merkaptoetanol, leukocytkonditionerat medium, hormonet erytropoietin samt Iscoves modifierade Dulbeccos medium, enligt Jeffrey W. Pollard i boken "Basic Cell Culture Protocols".

Lösningen blandas därefter med de cellprover som ska analyseras. Metylcellulosa tillsätts, varefter proverna inkuberas i en fuktad atmosfär med 5 procent koldioxid i 14 dagar innan resultaten utvärderas.

Migration av CFU i CD34-celler

CD34, eller kluster av differentieringsmolekyler, finns på vissa humana immunförsvarsceller och fungerar som en kontrollerad adhesionsfaktor på cellmembranen. Celler som bär på detta protein kan ha förmågan att migrera från en vävnad till en annan.

I detta protokoll tvättar teknikerna prover av migrerade CD34-celler för att avlägsna cytokinproteiner. Proverna centrifugeras därefter och återuppsuspenderas i ett medium som innehåller tillväxtfaktorer. Kolonierna räknas två veckor senare för att bedöma migrationsförmågan och den kolonibildande kapaciteten hos cellerna.