Fibronektin är ett glykoprotein, det vill säga en molekyl som består av både protein och kolhydrat. Detta glykoprotein är särskilt värdefullt vid odling av celler i serumfria miljöer samt för celltyper som kräver förankring för att växa optimalt. Studier har visat att fibronektin ökar cellernas överlevnad och förbättrar deras förankring i belagda plattor.
För beläggning kan fibronektin spädas ut till önskad koncentration med en buffert med pH 7–9 eller med serumfri odlingsmedium. Den slutliga lösningen måste ha rätt utspädningsgrad för att ytan ska beläggas jämnt och effektivt.
Observera att ett pH på 8 eller lägre kan leda till bildning av olösliga metallhydroxider, vilket kan påverka resultatet negativt. Kontrollera därför alltid buffertens pH innan utspädning.
Följ dessa steg för att belägga dina plattor korrekt:
Tillsätt lämplig mängd utspätt fibronektin i plattorna och inkubera dem i rumstemperatur i en timme. Efter inkubationen sugas kvarvarande material bort med pipett. Skölj sedan plattorna noggrant med destillerat vatten.
Viktigt: Skrapa aldrig botten av plattorna, eftersom detta kan skada den belagda ytan och försämra cellernas förmåga att fästa. De belagda plattorna kan antingen användas direkt eller förvaras i kylskåp vid 2–8 grader Celsius tills de behövs.
Fibronektin har visat sig ge utmärkt vidhäftning för celler som inte binder direkt till plast. Många celltyper, särskilt primära celler och känsliga cellinjer, kräver en extracellulär matris för att kunna fästa ordentligt på odlingsplattors ytor.
När plattor beläggs med fibronektin kan både vidhäftningen och celltillväxten förbättras avsevärt. Detta gör fibronektin till ett oumbärligt verktyg inom cellodling, särskilt i serumfria system där naturliga adhesionsproteiner från serum saknas.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online