Proteiner är en beståndsdel i varje cell i kroppen. Proteaser (även kallade proteolytiska enzymer eller proteinaser) är matsmältningsenzymer vars funktion är att bryta ner proteiner. Utöver matsmältningen spelar proteaser dessutom en avgörande roll vid blodkoagulering, reglering av ämnesomsättningen och immunförsvaret.
Under den biokemiska processen (katalysen) binder substraten till enzymets aktiva säte och omvandlas till en eller flera produkter, som sedan frigörs från sätet. Denna process kan förstärkas eller hämmas för att öka respektive minska reaktionerna i kroppen, beroende på önskat resultat.
Genom att märka substratprodukterna kan forskare mäta den enzymatiska aktiviteten. Fluorescerande märkning är en teknik som används för att färga specifika molekyler, vilket gör dem lättare att spåra.
Vanliga färgämnen är rhodamin och fluorescein. Dessa brukar kunna köpas direkt från tillverkarna.
Ta bort oanvänd fluorofor från målmolekylerna med hjälp av storleksuteslutningskromatografi – en metod som separerar molekyler efter storlek. Så kallade kolonner för borttagning av färgämnen används också ofta och marknadsförs vanligen tillsammans med märkningskits.
Använd ett instrument för fluorescensavläsning, till exempel ett fluorescensmikroskop. Ljus med en specifik våglängd leds genom molekylen (indirekt vid vissa tekniker), vilket får fluoroforen att lysa upp.
Eftersom analyserna mäter antingen hur mycket substrat som förbrukats eller hur mycket produkt som frigjorts under en viss tid kan enzymmängderna anges i mol (fysisk kvantitet) eller i enzymenheter (aktivitet).
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online