Den TMRE Protokollet

tetrametylrodamin etyl ( TMRE ) är en " långsam , lipofila , katjoniska fluorescerande reditribution färgämne " används i MitoPT ™ TMRE /TMRM mitokondriell membranpotential Assessment Kit den , som tillverkas av Immunochemistry Technologies , LLC . Processen hjälper till att visa en trans elektrisk potential gradient i celler . Förbereda analys

Protokollet är enkla att följa , och tar cirka 20 minuter att behandla vid 37 grader Celsius . De levande celler som används i analysen kan ta mellan några timmar och flera dagar för att förbereda för användning. De kontrollcellernakan ta flera timmar att förbereda , eftersom de måste förmås att genomgå apoptos .
Protocol Del 1

Kultur celler till en täthet optimal för apoptos eller oxidativ stress induktion , enligt dina specifika induktionsprotokoll, men inte att överstiga 10 ( 6 ) celler /ml . Addera protokoll del 2

Samtidigt tid , kultur en icke- inducerade negativa kontrollcellpopulation(vid samma densitet som den inducerade populationen. Addera Protocol Del 3

inducera apoptos eller avsikt depolarisera mitokondrierna följande önskad protokoll .
Protocol del 4

Bered 1X Assay /tvättbuffert .
protokoll delar 5-8

Förbered 1 mM eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lager . för protokoll del 6 , förbereda en 1:100 spädning av 1 mM , eller en 1:20 utspädning av 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lösning för tillsatta i cellodlingsprover.

protokoll del 7 , fläck celler med hjälp av en slutlig 20-200 nM koncentration av MitoPT ™ TMRE /TMRM lösning .

protokoll del 8 , analysera uppgifter . Addera