Flödescytometri bygger på principen om hydrodynamisk fokusering och använder en ljusexciterande källa, såsom en laser, för att mäta och analysera de fysikaliska egenskaperna hos enskilda partiklar. Tekniken tillämpas främst inom cellanalys, och de egenskaper som studeras inkluderar cellstorlek, granularitet och fluorescensintensitet. De viktigaste detekteringsmetoderna inom flödescytometri är framåtspritt ljus, sidokatterat ljus och fluorescens.
En flödescytometer består av tre huvuddelar: ett fluidsystem, ett optiskt system och ett elektroniskt system. Fluidsystemet ansvarar för att transportera provströmmen till laserstrålen för analys. Det optiska systemet innehåller lasrar och optiska filter som belyser proverna och leder ljussignalerna till rätt detektorer. Det detekterade ljuset omvandlas därefter till elektroniska signaler av det elektroniska systemet, vilka tolkas och bearbetas av en dator.
Diffrakterat ljus som sprids i framåtriktad riktning detekteras cirka 20 grader från laserstrålens axel av en fotodiod som kallas den framåtspridda kanalen (FSC). Intensiteten hos framåtspritt ljus är direkt proportionell mot partikelns ytarea och används därför som en indikator på cellstorlek samt för att skilja mellan levande och döda celler. Tack vare dessa egenskaper används FSC ofta vid immunfenotypning som utlösare för signalbehandlingen.
Sidokatterat ljus avser ljus som bryts vid cellulära gränssnitt och som mäts cirka 90 grader från laserstrålens axel av sidokatteringskanalen (SSC). Ljuset leds därefter till rätt detektor med hjälp av en stråldelare. Sidokatterat ljus motsvarar ungefär cellens granularitet eller interna komplexitet och används för att bedöma cellernas granulära innehåll. Genom att kombinera sidokatterat och framåtspritt ljus kan olika celltyper särskiljas från varandra.
Fluorescens ger både kvantitativ och kvalitativ information om intracellulära molekyler, såsom cytokiner och DNA, samt om receptorer på cellytan. Detta åstadkoms genom fluorokrommärkning och mätning vid olika våglängder. Varje fluorokrom har ett specifikt våglängdsområde inom vilket ljus absorberas, vilket kallas absorptionsspektrum. Fluorescens uppstår när en exciterad elektron emitterar en ljusfoton efter att ha absorberat ljusenergi.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online