Serieförspädningar (seriella utspädningar) används i biologiska och kemiska laboratorier främst för experimentella ändamål. Utspädningarna görs ofta logaritmiskt, det vill säga med faktorer om tio, och används vanligtvis för att späda ut bakterier, celler eller lösta ämnen som ska fungera som kontroller i experiment.
Eftersom alla prover kommer från samma utgångslösning ger utspädningarna en mycket exakt kontroll vid dos–respons-försök. De kan också behövas för att minska antalet partiklar i ett prov så att det passar automatiserad laboratorieutrustning.
En serieförspädning utförs genom att man tar en liten volym från ursprungsprovet, överför den till ett nytt rör och fyller på med spädlösning tills ursprungsvolymen är nådd. Grundformeln är:
Ursprunglig koncentration ÷ utspädningsfaktor = ny koncentration
I exemplet nedan späds 10 ml cellkultur med 2,5 × 107 celler/ml ut till 25 celler/ml i tre steg, med en utspädningsfaktor om 100 per steg.
Sätt på skyddsglasögonen och ta på dig handskar innan du hanterar några ämnen.
Märk de tre provrören med vaxpennan: 2,5 × 105, 2,5 × 103 och 25 celler/ml.
Beräkna den första utspädningen med formeln ursprunglig koncentration ÷ utspädningsfaktor = ny koncentration. Ursprungskoncentrationen är 2,5 × 107 celler/ml och utspädningsfaktorn är 100, vilket ger en ny koncentration på 2,5 × 105 celler/ml.
Späd ut ursprungsprovet med faktorn 100. Pipettera 1 ml av ursprungslösningen (2,5 × 107 celler/ml) i provröret märkt 2,5 × 105 celler/ml. Tillsätt därefter 99 ml vatten för att fullborda utspädningen.
Späd ut cellerna med ytterligare en faktor 100. Pipettera 1 ml från röret med 2,5 × 105 celler/ml till röret märkt 2,5 × 103 celler/ml och tillsätt 99 ml vatten.
Gör den sista utspädningen med faktorn 100. Pipettera 1 ml från röret med 2,5 × 103 celler/ml till röret märkt 25 celler/ml och tillsätt 99 ml vatten. Nu har du nått slutkoncentrationen 25 celler/ml.
Mixa varje rör noggrant, till exempel med virvelmixare, innan du överför nästa volym – annars blir utspädningarna ojämna. Arbeta dessutom sterilt när du hanterar cellkulturer för att undvika kontaminering.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online