Proteiner återfinns nästan aldrig ensamma, oavsett om de uttrycks naturligt i kroppen eller framställs artificiellt i laboratorium. Western blot-analys, även känd som immunoblotting, är en laboratoriemetod som används för att isolera och analysera ett specifikt protein ur en komplex blandning.
Western blotting består av tre huvudsteg:
Elektrofores: proteinblandningen separeras i distinkta band baserat på proteinernas storlek och laddning.
Transfer: proteinerna överförs från polymergelen till ett pappersunderlag, exempelvis ett nitrocellulosamembran.
Utveckling: det proteinband som är av intresse märks upp med antikroppar och analyseras.
Western blotting används i stor utsträckning inom biomedicinsk forskning. Eftersom proteiner är nyckelindikatorer för cellfunktion kan en Western blot ge värdefull information om cellernas metabolism och ursprungslinje. Metoden används också för att verifiera och studera expressionen av rekombinanta proteiner, vilket är centralt inom genteknik och proteinproduktion.
Western blots är både arbetsintensiva och tidskrävande, vilket begränsar deras användning inom klinisk rutindiagnostik. Trots detta spelar metoden en viktig roll vid diagnos av flera sjukdomar, däribland borrelia (Lymes sjukdom), hiv samt prionsjukdomar som Creutzfeldt-Jakobs sjukdom.
Den första demonstrationen av proteinsplittring i en polymergel publicerades år 1977. Två år senare, 1979, demonstrerades den snabba och effektiva överföringen av proteiner till papper genom elektroblottering – ett genombrott som blev avgörande för metodens spridning och acceptans, eftersom gelen i sig inte lämpar sig som underlag för immunkemiska reaktioner.
Begreppet "Western blot" är del av en något tillkrånglad vetenskaplig ordvits. Det motsvarande förfarandet för att karakterisera DNA kallas Southern blot, efter sin uppfinnare Edwin Southern. RNA-versionen har allmänt kommit att kallas Northern blot, och – kanske oundvikligt – fick proteinbaserad immunoblotting namnet Western blot. Fram till 2010 hade dock ingen "Eastern blot" etablerats som standardmetod.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online