Att förbereda vävnad för mikroskopisk undersökning ger forskare och läkare snabb tillgång till färsk information från både djur och människa. Inom medicinsk forskning är processen avgörande eftersom den ger en ögonblicksbild av vad som faktiskt händer i vävnaden, strax efter att provet har tagits från organismen. För att bevara preparatets kvalitet och undvika att det förstörs och blir oanvändbart måste dock vissa steg följas noggrant.
Fyll en av dina 250 ml-bägare med cirka 100 ml flytande kväve och placera motsvarande mängd torris i den andra bägaren. Ställ bägarna åt sidan. Tillsätt samtidigt frusen vävnadsmatris i basformen och ställ även den åt sidan så att allt är klart innan du börjar arbeta med provet.
Använd pincetten för att lyfta upp provet och placera det i kall fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Detta steg är viktigt eftersom det avlägsnar allt blod från vävnaden, vilket annars skulle kunna störa den senare analysen.
Lägg vävnaden i en ren och torr petriskål och se till att den ligger helt plant. Lägg ett laboratorietorkpapper ovanpå för att absorbera eventuellt kvarvarande blod som inte togs bort under PBS-sköljningen. Ta bort pappret när absorptionen är klar.
Överför nu vävnaden till basformen med den frusna vävnadsmatrisen, nära bottnen. Se återigen till att vävnaden ligger plant, eftersom detta påverkar kvaliteten på de snitt som ska tas senare.
Håll kanten på basformen med pincetten och lyft ut den ur behållaren. Sänk ner den i bägaren med flytande kväve. Endast formens undersida ska komma i kontakt med ytan av det flytande kvävet, och kontakten får inte pågå längre än 30 sekunder.
Ta bort vävnaden från det flytande kvävet och lägg den ovanpå torrisen i den andra 250 ml-bägaren. Därefter kan provet förvaras i frys vid −80 °C tills det är dags att påbörja själva snittningen.
Arbeta alltid skyndsamt men kontrollerat när du hanterar flytande kväve, eftersom det har en temperatur på runt −196 °C och kan orsaka allvarliga köldskador vid direkt hudkontakt. Använd lämplig skyddsutrustning, exempelvis isolerade handskar och skyddsglasögon. Se dessutom till att vävnaden aldrig tinar upp mellan stegen, eftersom upprepade frys- och töcykler kan skada cellstrukturen och försämra resultatet av den mikroskopiska undersökningen.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online