Bakterier finns överallt i vår omgivning – på händer, ytor och inte minst på mat. De är lätta att samla in och odla, vilket gör dem till ett populärt studieobjekt både i skolan och inom forskning. Den vanligaste metoden för att odla bakterier är i petriskålar som innehåller agar.
Agar är ett geléliknande medium som innehåller näringsämnen som gör det möjligt för mikroorganismer, exempelvis bakterier, att föröka sig snabbt och bilda synliga kolonier. Genom att studera koloniernas antal, färg och form får man en första uppfattning om vilka bakterietyper som finns på frukten. Med hjälp av gramfärgning och mikroskop kan analysen sedan fördjupas ytterligare.
Ta på dig skyddshandskar. Använd skyddande laboratoriehandskar genom hela experimentet och se till att ha odlingsöglan och frukten till hands.
Sterilisera odlingsöglan. Tänd bunsenbrännaren och håll öglan i lågan tills den glöder rött. Detta dödar alla bakterier som redan finns på öglan.
Samla in bakterier från frukten. Gnugga odlingsöglan mot fruktens yta. Öppna omedelbart en färsk petriskål med agar och stryk ut öglan över agarytan. Håll därefter öglan över lågan igen för att sterilisera den och sätt tillbaka locket på petriskålen.
Upprepa för fler plattor. Gör samma sak på ytterligare två agarplattor. Flera plattor gör det möjligt att jämföra resultaten och ger ett mer tillförlitligt resultat.
Inkubera plattorna. Ställ agarplattorna i en inkubator vid 37 °C i 48 timmar. Under denna tid förökar sig bakterierna och bildar synliga kolonier.
Dokumentera kolonierna. Ta ut plattorna ur inkubatorn och notera antal, färg och form på de kolonier som har bildats. Jämför med en bakterieidentifieringstabell eller bok för att avgöra vilken typ av kolonier det rör sig om.
Förbered ett mikroskopprov. Sterilisera odlingsöglan i lågan och stryk den mot en av kolonierna på plattan. Smet ut provet på ett objektglas, tillsätt en droppe destillerat vatten och låt glaset torka. Håll kort glaset över lågan för att fixera provet, så att bakterierna fastnar på glaset.
Färga med gramfärgning. Lägg objektglaset på glashållaren i plastbaljan och droppa gramfärgning (kristallviolett) över glaset. Låt verka i en minut. Baljan fångar upp överflödig färg som rinner av. Färgningen gör bakterierna tydliga och avslöjar om de är grampositiva eller gramnegativa.
Skölj glaset. Skölj objektglaset med destillerat vatten. Skölj därefter med 95 % etanol, vilket avlägsnar färgen från bakterier med tunna cellväggar. Avsluta med att skölja igen med destillerat vatten.
Studera i mikroskop. Granska objektglaset under ljusmikroskopet. Grampositiva bakterier framstår som mörklila med tjocka cellväggar, medan gramnegativa bakterier är blekt lila med tunna cellväggar. Notera även bakteriernas form och antal.
Arbeta alltid nära bunsenbrännarens flamma för att minimera risken för kontaminering. Tvätta händerna noggrant efter experimentet och desinficera arbetsytan. Kassera använda petriskålar enligt gällande rutiner – koka eller autoklavera dem helst innan de slängs, eftersom odlade bakterier aldrig ska hamna i vanligt sopavfall.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online