Hur man mäter katalas koncentrationer

Katalas är en biologisk ( organisk ) katalysator . Detta enzym är en av de mest potenta katalysatorer kända och har positiva effekter på den mänskliga kroppen och är avgörande för livet . Katalas fungerar som en katalysator för att påskynda nedbrytningen av väteperoxid . Väteperoxid är en metabolisk biprodukt som är giftigt för cellerna om den inte avlägsnas . Katalas hjälper till att bryta ned väteperoxid till vatten och syre. Katalas hjälper också i oxiderande andra gifter såsom fenoler , myrsyra , formaldehyd och alkoholer . Saker du behöver
Två 110 ml kromogen i fosfatbuffert
300 mikroliter substrat - 30 % väteperoxid
400 μL.HRP - pepparrotsperoxidas i fosfatbuffert
60 ml fosfat buffert
250 ml provspädningstensid i fosfatbuffert
Två 30 ml substratspädningsfosfatbuffert
Två 30 mL stoppreagens- natriumazid
Två flaskor 160 U /injektionsflaska standard katalas
spektrofotometer
10 mikroliter justerbara pipetter
1 cm stig - längd spektrofotometriska kyvetter
1,5 ml polypropylen mikrorör med lock
Provrör - 12x75 millimeter ( 2,5 ml vardera ) katalog Timer
Avjoniserat vatten

Visa fler Instruktioner
1

Förbered lager av katalas som du kommer att mäta genom att tillsätta 200 mikroliter ( ni) avjoniserat vatten till katalas koncentrationer i 50 milliliter ( ml ) injektionsflaskor . Nivån på catalese koncentration bör vara 160 enheter per milliliter ( U /ml).
2

till 30 mikroliter av utspädd katalas i rör . Lägg till 500 mikroliter av substratet ( väteperoxid - 10mm H2O2 ) i varje rör . Var noga med att inte stänka väteperoxiden när du arbetar med den . Addera 3

Inkubera varje rör under en minut vid rumstemperatur .
4

Lägg 500 &mu , L reagens till varje flaska . Cap varje flaska och blanda genom att vända flaskan upp och ned . Inte snurra blandningen , skaka flaskan och rör om med ett föremål .
5

Tillsätt 20 mikroliter av varje reaktionsblandning i provrören . Tillsätt 2 ml av HRP -reagenset in i varje provrör. Återigen, blanda lösningen genom att vända provrören flera gånger.
6

Inkubera lösningen igen, denna gång i 10 minuter vid rumstemperatur.
7

Avläs absorbansen nivå av lösningen med en spektrofotometer. Spektrofotometern mäter ljuset våglängder för att avgöra exakt vilka ämnen som finns och och vilka koncentrationer . Denna metod kommer att ge en korrekt avläsning av katalas koncentrationer. Den information som är användbar i samband med samverkan av katalas med väteperoxid , som i detta experiment , och som sker naturligt i människokroppen . Addera